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目的:重型颅脑创伤(traumatic brain injury,TBI)后昏迷是神经外科领域治疗的难点、重点和热点且至今无公认有效的方法。右侧正中神经刺激(right median nerve stimulation,RMNS)是近年来不断被报道的一种促醒方法,但其有效性尚未得到充分证实,更罕见对其作用机制进行探讨,导致目前昏迷促醒仍缺乏可靠的方法和理论依据。本研究旨在探讨RMNS对TBI后昏迷早期促醒的作用,并初步探讨早期促醒后患者脑脊液中miRNA表达的变化。方法:(1)选取发病1~2周的TBI昏迷患者,随机分为治疗组和对照组。入组患者需要满足(1)格拉斯哥昏迷量表(Glasgow Coma Scale,GCS)得分≤8分;(2)排除生命体征不平稳、颅内感染、脑积水和颅内血肿占位效应未解除等影响意识恢复的情况。(2)两组均给予神经外科常规治疗,治疗组在常规治疗的基础上加用RMNS促醒治疗。治疗组患者于RMNS治疗前及治疗2周后均接受GCS评分、脑电图(Electroencephalograph,EEG)、躯体感觉诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)及脑干听觉诱发电位(brainstem auditory evoked potential,BAEP)检查。对照组患者在相同时间点进行上述GCS评分和神经电生理检查。EEG、SEP及BAEP分别采用Young改良分级、Judson分级及Hall分级进行评价。发病1个月时两组进行昏迷恢复量表修订版评分(coma recovery scale-revised,CRS-R)及格拉斯哥预后评分(Glasgow Outcome Scale,GOS)。从治疗组中随机选取5名患者在RMNS治疗前及治疗2周后行MRI弥散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)检查,测量脑干的各向异性分数(fractional anisotraphy,FA)值。(3)治疗组中行DTI检查的5名患者在RMNS治疗前及治疗2周后分别留取脑脊液,提取总RNA,对RNA进行质控,构建RNA文库并进行文库质控,应用高通量测序技术进行测序,分析TBI昏迷患者经RMNS促醒治疗后脑脊液中微小RNA(microRNA,miRNA)表达的变化,对差异性表达的miRNA的靶基因进行预测,并进行基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路分析。(4)统计学方法:使用SPSS 19.0软件进行统计学分析,计量资料数据表示为均数±标准差(x±s)。t检验用于计量资料数据统计,卡方检验和秩和检验用于计数资料数据统计。P<0.05表示有统计学意义。结果:(1)根据入组及剔除标准,最终40例患者完成试验,其中治疗组20例,对照组20例。治疗前两组在性别构成、年龄分布、GCS评分及是否进行手术方面无统计学差异(P>0.05),两组具有可比性。(2)治疗2周后,治疗组和对照组的GCS评分分别为11.30±2.45和7.05±1.15,治疗组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组的EEG、SEP及BAEP均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);在疾病发病一个月时,治疗组和对照组的CRS-R评分分别为16.20±4.75和12.25±5.41,治疗组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组的GOS优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);从治疗组随机选取的5名行DTI检查的患者,其GCS及CRS-R评分均有不同程度提高,并且在DTI成像上观察到脑干FA值的升高。(3)治疗组中行DTI检查的5名患者经RMNS促醒治疗2周后与治疗前相比,脑脊液样本中有38个miRNA表达有显著差异(Fold change≥2,P-value<0.05),其中34个miRNA表达上调,4个miRNA表达下调。选取Top 5上调的miRNA(包括:hsa-miR-204-5p,hsa-miR-532-5p,hsa-miR-574-5p,hsa-miR-1180-3p和hsa-miR-1298-5p)和下调的miRNA(包括:hsa-miR-145-5p和hsa-miR-182-5p)用于预测靶基因,发现交联最多的靶基因为:BIN2、MYZAP、CAMSAP2、DOCK9、PPP4R2。GO分析显示,差异表达的miRNA可能与神经元生长、修复以及神经信号的传递有关。在信号通路方面,差异表达的miRNA与肿瘤坏死因子信号通路和多巴胺能突触相关度最高。结论:(1)RMNS对TBI后昏迷具有早期促醒作用,可以改善患者的预后;(2)TBI昏迷患者经RMNS早期促醒治疗后,脑脊液中有一系列miRNA表达发生变化,这些差异性表达的miRNA可能通过对靶基因表达的调控,参与促醒治疗后特定的生物过程。推测可能是通过减少神经细胞凋亡和升高多巴胺水平起到早期促醒作用。