论文部分内容阅读
孕酮是一种性激素，它是一种反应卵巢活动状态的精确指示剂。监测乳汁孕酮含量是预防和治疗奶牛繁殖障碍性疾病的最有效手段。孕酮在奶牛体内含量比较低，需要有高效、灵敏和特异性的检测方法才能准确测得。本研究在优化的孕酮生物传感器的基础上，结合商品化的ELISA试剂盒开展了对发情的、妊娠的、繁殖障碍疾病的奶牛血浆和乳汁中的生殖激素，尤其是对孕酮进行检测，旨在了解优化的孕酮生物传感器的检测性能，为奶牛临床应用提供科学依据。首先，本实验选用孕酮衍生物孕酮-11α-半琥珀酸酯（11α-hydroxyprogesteronehemisuccinate）作为半抗原与卵清白蛋白（OVA）在偶联剂二环己基碳二亚胺（DDC）的作用下制备成完全抗原（P4-OVA）；通过免疫学检测证明偶联完全抗原成功。以此为基础优化了孕酮免疫生物传感器的反应条件：生物传感器检测孕酮的线性范围在0.31~50ng/mL，检测限为0.31ng/mL。生物传感器的曲线方程为： y=-4.9461x+8.7982(R2=0.9932)。传感器检测的选择特异性较好，与皮质酮、皮质醇、雄烯二酮无交叉反应。其次，本实验应用商品化的ELISA试剂盒对配种后妊娠奶牛的血浆雌二醇、促黄体素、促卵泡素和孕酮浓度进行了检测，同时应用优化的孕酮免疫生物传感器对乳汁孕酮进行了检测，并与血浆孕酮含量进行了比对，结果呈正相关。确定了优化的孕酮免疫生物传感器对奶牛妊娠检测的孕酮浓度范围为10~15ng/mL。此外，本实验应用商品化的ELISA试剂盒对产后发情奶牛的血浆雌二醇、促黄体素、促卵泡素和孕酮浓度进行了检测，同时应用优化的孕酮免疫生物传感器对乳汁孕酮进行了检测，并与血浆孕酮含量进行了比对，结果呈正相关。确定了优化的孕酮免疫生物传感器对奶牛发情检测的孕酮浓度范围为4~10ng/mL。最后，本实验应用商品化的ELISA试剂盒对乏情奶牛的血浆雌二醇、促黄体素、促卵泡素和孕酮浓度进行了检测，同时应用优化的孕酮免疫生物传感器对乳汁孕酮进行了检测，并与血浆孕酮含量进行了比对，结果呈正相关。确定了优化的孕酮免疫生物传感器对持久黄体的孕酮浓度检测范围为10~16ng/mL，卵巢静止的孕酮浓度检测范围为3~7ng/mL，黄体囊肿的孕酮浓度检测范围为12~18ng/mL。因为繁殖障碍疾病的病因复杂，所以单凭乳汁中孕酮的浓度来确诊是困难的，通常需要结合直肠检查、B超影像学检测、临床症状等方面综合分析进行确诊。本实验利用优化的孕酮生物传感器测定了发情的、妊娠的、繁殖障碍疾病的奶牛乳汁中孕酮浓度，提供了相应的检测范围，为今后推广应用奠定了方法学基础。