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目的:丹参是常用的活血化瘀中药,具有显著的心血管保护活性,然其作用机制尚未明确。LOX-1是内皮细胞上ox-LDL的主要受体,在动脉粥样硬化(Atherosclerosis, As)中起重要作用。本研究拟探讨丹参中的主要活性成分之一的隐丹参酮(Cryptotans-hinone,CPT)对TNFα诱导人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells, HUVECs) LOX-1表达作用及其可能机制。 方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,以TNFα为工具药物,MTT法测定TNFα对内皮细胞的毒性作用;Real-time RT-PCR测定TNFα诱导的LOX-1 mRNA表达,免疫印迹法检测TNFα对LOX-1蛋白表达以及CPT的干预作用;荧光探针DCFH2-DA检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的生成;利用不同来源之ROS抑制剂鉴定ROS之可能来源;测定TNFα对信号通路蛋白NF-κB p65、ERK磷酸化水平及CPT的干预作用;DiI-ox-LDL标记法检测内皮细胞对ox-LDL的吞噬及CPT的干预作用;大鼠腹腔注射TNFα,测定CPT对主动脉上LOX-1蛋白表达及NF-κB p65、ERK磷酸化水平。 结果:10 ng/ml的TNFα对HUVECs无明显的毒性作用;TNFα可剂量和时间依赖性的诱导LOX-1 mRNA和蛋白的表达;TNFα可诱导内皮细胞内活性氧的生成,这可被鱼藤酮、DPI、乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine, NAC)所抑制;CPT可浓度依赖性的抑制 TNFα诱导的 ROS生成;CPT可浓度依赖性地抑制 TNFα诱导的内皮细胞LOX-1蛋白表达,抑制 TNFα诱导的内皮细胞 NF-κB-p65、ERK磷酸化水平;ROS抑制剂鱼藤酮、DPI、ROS清除剂 NAC、NF-κB抑制剂 Bay11-7082、ERK抑制剂PD98059均可显著抑制TNFα诱导LOX-1表达;CPT和NAC抑制TNFα诱导大鼠主动脉LOX-1表达以及ERK、NF-κB p65磷酸化水平。 结论: TNFα可通过ROS介导的NF-κB/ERK途径诱导内皮细胞LOX-1表达,促进ox-LDL的内吞;CPT显著抑制TNFα诱导的内皮LOX-1表达及其介导的ox-LDL内吞;CPT对LOX-1的调节可能参与了其抗As活性。