rLj-RGD4是以rLj-RGD3为原型人工合成的基因重组肽。rLj-RGD3含有3个RGD模体,分子量为13.5 kDa。由于rLj-RGD3在生物制药中存在一定的免疫原性风险,故对rLj-RGD3基因进行缺失突变,设计了表达产物分子量为6.27 kDa,含有4个RGD模体的rLj-RGD4肽基因,并对之进行了合成及重组表达。本课题组以人胰腺肿瘤细胞PANC-01作为模型,观察rLj-RGD4对肿瘤细胞的生物学影响。利用细胞增殖实验（MTT）的方法来检测细胞的增殖,结果显示,rLj-RGD4呈剂量依赖的方式抑制PANC-01细胞的增殖,其IC₅₀值为3.25μM。根据Transwell法和细胞划痕法检测细胞的迁移能力。结果显示,rLj-RGD4对碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）诱导的PANC-01细胞迁移具有抑制作用,且呈剂量依赖方式。利用Transwell法和人工基质膜Matrigel模仿体内细胞外基质环境以检测细胞的浸润能力。结果显示,rLj-RGD4仍以剂量依赖的方式抑制bFGF诱导的PANC-01细胞浸润。与此同时,本论文检验了rLj-RGD4引起PANC-01细胞凋亡的形态学特征。Hochest33258染色和TUNEL-FITC染色结果显示,rLj-RGD4能以剂量依赖的方式诱导PANC-01细胞发生凋亡,且细胞核发生片段化裂解。此外,鬼笔环肽-FITC染色显示,随着rLj-RGD4剂量的增加,细胞骨架形态逐渐被破坏。接下来,本论文使用western blot实验方法对rLj-RGD4涉及的凋亡信号通路进行了研究。实验结果显示,rLj-RGD4主要从两个信号传导途径诱导细胞发生凋亡,即rLj-RGD4可以激活外源途径中的Caspase 3和Caspase 8,并增加Cleaved-Caspase 3和Cleaved-Caspase 8的含量,从而诱导细胞发生凋亡;rLj-RGD4还能抑制内源途径中Akt的磷酸化,减少下游的抗凋亡基因Bcl-2的蛋白含量,并同时增加促凋亡Bax蛋白的含量,进而诱导细胞发生凋亡。综上所述,rLj-RGD4能够明显抑制PANC-01细胞的增殖、迁移及浸润过程,并同时诱导细胞发生凋亡。由于rLj-RGD4分子量低,因此有望在未来成为抗肿瘤的新药。