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背景:博尔纳病病毒(borna disease virus, BDV)是一种非节段负股单链RNA病毒(NNS),具有高度嗜神经性并以非细胞溶解的方式在感染细胞中复制BDV能实验性感染许多像兔、猴直到鸡等范围内脊椎动物。流行病学调查发现BDV的自然感染宿主范围也很广泛。文献报道了在马、羊、兔、猴、猫、狗和骆驼中BDV感染造成的致死性脑炎。无症状感染在世界各地多种动物物种中也有报道。因此BDV很可能感染所有温血动物。大量的流行病学调查发现,人类的神经精神疾病和BDV感染有一定联系,因此BDV又被称为“情感病毒”。感染新生大鼠导致学习记忆能力下降,其神经病理学变化基础皮质萎缩、小脑发育不良、海马齿状脑回颗粒细胞神经元的减少、小脑浦肯野细胞的减少。BDV诱导神经元的凋亡明确的分子机制目前还需进一步的研究和确认。目的:本文通过BDV病毒Hu-H1株感染人脑胶质母细胞瘤U87细胞,对病毒感染后U87细胞增殖所率和凋亡情况作一个初步的研究,对BDV与细胞的相互作用规律有一个初步的认识。方法:1通过反复冻融持续感染BDV的OL细胞来获取病毒液。2.病毒液的浓度采用免疫细胞化学的方法检测p40蛋白阳性细胞集落,计算病毒液的滴度。3.采用CCK8试剂盒检测感染后U87细胞和未感染细胞在1-7天的增殖情况。4.采用Annexin V/PI双染流式细胞仪检测感染和正常U87细胞在1、3、5天时细胞凋亡比例的变化。5.PI单染流式细胞仪检测U87细胞感染后24h内周期有无阻滞情况。6.免疫印迹法WB检测U87细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2在感染后的变化。结果:1.经免疫细胞化学显色方法测得Hu-H1滴度为6×10^4FFU/mL。2.BDV感染U87后3天左右即可观察到p40蛋白的表达。说明BDV可以持续感染U87细胞。3.经CCK8法检测,BDV感染的U87细胞增殖速率在第1天时与对照组无差异;在第2-4天时,其增殖速率低于对照组细胞,BDV抑制了细胞的增殖;5-6天时感染组细胞增殖速率开始加快,超过了对照组,BDV促进了细胞的增殖。4.BDV对凋亡的影响:感染组在第1天时和对照组无差异;感染后第3天,感染组细胞凋亡高于对照组,此时BDV促进了U87细胞的凋亡;第5天时,感染组细胞凋亡又低于对照组,此时BDV抑制了U87的凋亡。5.BDV感染U87细胞后,细胞周期在血清饥饿24h,此时感染组和对照组无差异,说明血清饥饿有效阻滞了周期。在6h、15h和24h,感染组的增殖指数都比对照组低,说明BDV在这段时间对细胞周期有干扰作用,妨碍了细胞的生长增殖。6.Bcl-2蛋白在第1天时感染组和对照组无差异;第3和5天,感染组表达水平低于对照组。Bax蛋白表达在第1天时也无差异,第3和5天时,感染组明显高于对照组。结论:本实验中,BDV Hu-H1病毒株能顺利感染U87细胞,并能够对U87细胞的增殖和凋亡产生影响。在前阶段,病毒抑制了细胞的增殖,促进了细胞的凋亡;在后一阶段,病毒有可能转而促进细胞增殖,抑制细胞凋亡。