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目的：支气管哮喘(哮喘)是一种复杂的气道炎症性疾病,其主要病理特点是气道炎症,气道高反应性(airway hyperreactivity, AHR)和气道重塑。哮喘发病过程中涉及多种炎症细胞和介质对气道的作用,主要包括嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、肥大细胞、淋巴细胞等。而在这些炎症细胞活化和迁移过程中,趋化因子发挥着重要作用。根据辅助性T细胞(Th细胞)产生细胞因子的类型分为Th1和Th2型,近年来研究认为辅助性T淋巴细胞的两种亚型Th1和Th2的失衡是哮喘最重要的发病机制。Th细胞可能表达不同的趋化因子受体,使得它们向不同组织趋化。分别用IL-12和IL-4将初始T细胞分化为Th1和Th2细胞型,出现了两种趋化因子受体的表达模式：Th1细胞表达CCR5和CXCR3,而Th2细胞表达CCR3, CCR4和CCR8。本实验意在讨论是否可以通过调节哮喘发病过程中趋化因子及趋化因子受体来调节Th1/Th2的平衡,以达到治疗哮喘的目的。我们以鸡卵清蛋白(ovalbumin OVA)致敏小鼠,建立急性哮喘小鼠模型,观察HSP70/CD80DNA疫苗对急性哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的治疗作用,并进一步探讨其可能的机制。方法：大量提取pVAX1质粒和HSP70/CD80DNA质粒,测定所提质粒含量和纯度,并进行酶切鉴定。将40只健康雌性BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只：对照组(A组)、哮喘组(B组)、pVAX1载体组(C组)和HSP70/CD80DNA疫苗组(D组)。以OVA致敏小鼠,建立小鼠急性哮喘模型。C组和D组经股四头肌肌肉分别注射pVAX1质粒和HSP70/CD80DNA疫苗；A组与B组注射相同剂量生理盐水。末次OVA激发后24h,通过全身体积描记仪检测吸入乙酰甲胆碱(methacholine, MCh)检测小鼠气道反应性高低。眼眶采血用ELISA方法检测外周血IgE含量。HE染色下观察小鼠肺组织病理变化；PAS染色观察杯状细胞增生和黏液分泌情况；免疫组化检测CCL5和CCL17抗原在气道的分布及表达情况。Real-Time PCR检测肺脏组织CCR5和CCR4基因的表达水平。结果：1.小鼠气道反应性：用不同浓度MCh刺激后,与A组相比,B组和C组小鼠的气道反应性明显增高,而D组有所降低。在MCh浓度达24mg/ml后,B组和C组小鼠气道反应性显著高于A组(P<0.05),而D组小鼠气道反应性低于B组开始有明显差异(P<0.05)。2.肺组织病理学改变：在肺HE染色病理切片中,B组和C组小鼠支气管、血管周围和肺泡有明显炎细胞浸润,其中以嗜酸性粒细胞和淋巴细胞为主。而在D组,HSP70/CD80DNA疫苗能有效抑制气道、血管周围和肺泡的炎细胞浸润(P<0.05)；在肺切片PAS染色中,B组和C组小鼠气道上皮中杯状细胞增生肥大,PAS着色细胞明显增加,管腔中有大量黏液形成,A组和D组PAS阳性细胞及管腔内的黏液分泌明显少于B组和C组(P<0.05)。3.血清IgE浓度变化：与A组比较,B组和C组小鼠血清IgE含量明显升高(P<0.05)；与B组相比,D组小鼠血清IgE含量降低(P<0.05)。4.免疫组化检测肺组织CCL5和CCL17蛋白表达情况：免疫组化显示CCL5和CCL17蛋白主要表达于支气管上皮细胞。在CCL5免疫组化中,A组和D组表达明显增多呈呈阳性或强阳性, B组和C组表达呈弱阳性；在CCL17免疫组化中,B组和C组表达明显增多呈阳性或强阳性(P<0.05),与B组比较,A组和D组表达呈阴性或弱阳性(P<0.05)。5.Real-Time PCR法检测肺组织CCR5和CCR4的基因表达水平：B组和C组CCR5mRNA表达较A组降低；与B组和C组比较,D组CCR5mRNA表达增加(P<0.05)。与A组比较,B组和C组肺组织CCR4mRNA表达增加(P<0.05)；与B组相比,D组肺组织CCR4mRNA表达减少(P<0.05)。结论：1.本实验用OVA致敏小鼠,建立小鼠急性哮喘模型,小鼠出现气道炎症反应,气道高反应性,模型建立成功。2.在哮喘模型基础上,使用HSP70/CD80DNA疫苗处理可减轻气道炎症反应,减少粘液分泌,降低气道阻力。3.另外,结果显示HSP70/CD80DNA疫苗可增强CCL5在气道上皮中的表达,减少CCL17表达；HSP70/CD80DNA疫苗还可通过上调CCR5抑制CCR4,使CCR5/CCR4升高,从而恢复Th1/Th2平衡,起到治疗哮喘的作用,为该疫苗作为新型免疫调节性疫苗提供新的实验基础。