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目的:构建抗IL-4R鼠源化单链抗体scFv表达载体并表达重组蛋白;构建抗IL-4R单链抗体连接蜂毒肽基因的表达载体并表达重组融合蛋白。方法:1)将前期工作中经过富集与筛选得到的抗IL-4R单链抗体用噬菌体展示技术进行抗IL-4R单链抗体重组蛋白诱导表达并检测。2)构建抗IL-4R单链抗体基因scFv表达载体pET-32a-scFv,转入E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,优化并提高抗IL-4R单链抗体蛋白表达量。3)通过SOE-PCR技术连接抗IL-4R单链抗体scFv与蜂毒肽基因MLT,构建抗IL-4R单链抗体连接蜂毒肽的重组质粒pET-32a-scFv-MLT,转入E.coli BL21(DE3)内诱导表达融合蛋白。4)通过SDS-PAGE和Western Blot等方法,分别检测获得的两个重组scFv及scFv-MLT表达蛋白的分子量和特异性,并进行重组蛋白的纯化及透析-稀释复合复性,成功得到纯化的目的蛋白。结果:1)抗IL-4R单链抗体基因scFv在噬菌体展示系统中以可溶性形式表达,分子量大小在28KD左右,但表达量低,且不易于纯化。2)抗IL-4R单链抗体基因scFv在载体pET-32a与E.coli BL21(DE3)原核表达体系中以包涵体形式表达,表达量高,经纯化及透析-稀释复合复性的方法得到目的蛋白,其分子量约45KD,纯化及复性结果较好。3)成功连接抗IL-4R单链抗体基因scFv与蜂毒肽基因MLT,构建了pET-32a-scFv-MLT重组质粒,该重组质粒转入E.coli BL21(DE3)内诱导表达出了重组融合蛋白。经SDS-PAGE和Western Blot等方法鉴定出该重组蛋白以包涵体形式表达,表达量较高,经纯化及透析-稀释复合复性的方法得到的纯化的目的蛋白,其分子量约52KD。结论:1)通过采用噬菌体展示技术表达出抗IL-4R单链抗体重组蛋白,但表达量低不利于纯化。2)采用原核表达方案,成功的表达出抗IL-4R单链抗体基因scFv的重组蛋白。3)采用原核表达方案,成功的表达出抗IL-4R单链抗体基因scFv与蜂毒肽的重组scFv-MLT融合蛋白。4)本研究为抗IL-4R单链抗体作为载体的靶向治疗研究奠定了前期工作基础。