【摘 要】
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泥蚶(Tegillarca granosa)是我国东南沿海主要海水养殖经济贝类之一,也是近岸滩涂生态系统的重要组成部分。在泥蚶人工育苗的过程中,精子浓度往往远大于卵子,因此,泥蚶多精受精现象
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泥蚶(Tegillarca granosa)是我国东南沿海主要海水养殖经济贝类之一,也是近岸滩涂生态系统的重要组成部分。在泥蚶人工育苗的过程中,精子浓度往往远大于卵子,因此,泥蚶多精受精现象时有发生。多精受精会导致受精卵细胞的卵裂发生紊乱,并最终导致个体发育异常死亡。但是,由于海洋贝类卵细胞阻止多精受精机制的研究报道到目前仍较少,其参与该机制中的分子通路尚不明晰,极大的限制了探究解决泥蚶育苗生产中多精受精问题的解决。在线虫(Caenorhabditis elegans)中,几丁质合酶(CHS)被报道与皮层反应及其介导的多精受精阻止机制相关,但CHS基因在海洋贝类包括泥蚶中的存在和功能尚未见报道。本试验以转录组为基础,采用RACE技术,成功克隆得到泥蚶CHS基因的全长cDNA序列(GenBank编号为:KU845300),并分析了CHS基因核苷酸和氨基酸序列结构:CHS基因cDNA全长为7,792bp,其中5'-UTR为37bp,3'-UTR为909bp,ORF共6,843bp,共编码2,281个氨基酸。同源比对分析显示泥蚶几丁质合酶与江珧、毛肤石鳖、马氏珠母贝和地中海贻贝几丁质合酶具有高保守性。经实时荧光定量方法检测了所获得的基因在组织中的表达情况,结果显示:几丁质合酶在鳃,性腺,外套膜和内脏团中均有表达,但在性腺中表达量最高,在内脏团中表达量最低。为了进一步证明泥蚶CHS基因在受精中的功能,通过CHS的特异性抑制剂尼可霉素Z处理泥蚶卵细胞并分析多精受精率,结果表明,泥蚶多精受精率在尼可霉素Z处理后显著上升,表明CHS在泥蚶卵细胞阻止多精受精过程中具有着重要的生物学功能。
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