鳞翅目昆虫FXPRLamide神经肽的组织学定位及功能研究

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以鳞翅目(Lepitoptera)的昆虫为研究对象,对滞育激素(diapause hormone,DH)-信息素生物合成激活肽(pheromone biosynthesis activating neuropeptide,PBAN)基因的表达定位、表达变化及其功能进行了研究.在家蚕中,DH已知是诱导胚胎发育停滞的神经肽,但是在其它昆虫,DH的功能尚不清楚.PBAN的功能是促进鳞翅目昆虫的性信息素的生物合成.DH-PBAN基因编码五个神经肽:DH,PBAN,α-、β-和γ-SGNP.这些神经肽都具有相同的C末端:FXPRLamide,所以归属于FXPRL家族神经肽.根据cDNA序列,合成棉铃虫(Helicoverpa armigera)和家蚕(Bombyxmori)的滞育激素及棉铃虫信息素生物合成激活肽,制备抗体,Western-blot和免疫组化方法检测DH-PBAN基因在蛋白水平上的表达、分布、合成及释放;原位杂交方法定位DH-PBAN mRNA在咽下神经节(suboesophageal ganglion,SG)的3簇神经分泌细胞;酶联免疫反应(ELISA)检测体液中DH-PBAN的滴度;生理学实验推测了棉铃虫DH-PBAN基因可能的新功能.结果表明,棉铃虫从胚胎、幼虫、蛹到成虫的整个世代,DH-PBAN基因都在咽下神经节的上颚、下颚和上唇神经元中表达,通过心侧体(corpus cardiacum,CC)和末端腹神经节(terminal abdominal ganglion,TAG)释放.滞育与非滞育个体之间DH-PBAN基因的表达差异说明这些神经肽可能参与昆虫生长发育的调节.脑和SG的摘除及DH-PBAN在thoracic ganglia(TG)中的表达证实了这种调节功能.幼虫时期DH-PBAN基因产物----FXPRLamide神经肽和蜕皮激素的注射可显著延长龄期,血淋巴中FXPRLamide神经肽和蜕皮激素含量的变化说明两者对六龄幼虫生长的调节作用,且FXPRLamide神经肽可能通过调节前胸腺蜕皮激素的合成和/或释放而起作用.家蚕胚胎时期免疫组化结果表明脑、SG及TGs中均有阳性反应,DH也通过CC和TAG释放.DH-PBAN基因主要表达在SG的上颚、下颚和上唇神经元,SG的一对侧边细胞和TGs的一对腹中线细胞中也有表达.幼虫时期的原位杂交结果和RT-PCR证实了这种新的分布.此外,免疫组化结果还证实了柞蚕、蓖麻蚕和甜菜夜蛾中DH-PBAN类似肽的存在.
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