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目的：通过对怀地黄药材进行系统研究,制定怀地黄中糖类指标性成分多糖、小分子总糖、葡萄糖、蔗糖、棉籽糖、水苏糖及药材中水分的测定方法,从而更有效的保证怀地黄药材的质量,为怀地黄药材的种植提供科学依据；初步建立怀地黄药材低聚糖部位的HPLC指纹图谱,为道地产区怀地黄药材以糖类成分为指标的内在质量控制提供科学依据。
方法：本实验共采集 13 批鲜地黄样本,全部产自道地产区,生地黄样本自行加工。采用分光光度法分别对鲜地黄和生地黄中的多糖及小分子总糖进行含量测定；采用RP-RID-HPLC法对单糖、低聚糖成分进行含量测定；分别建立了13批怀地黄样本鲜品及生品的HPLC指纹图谱,以相对保留时间和相对峰面积为指标进行方法学考察,采用 CHROMAP1.5 指纹图谱处理软件对其进行聚类分析及相似度分析,并对鲜品及生品的HPLC图谱进行比较。
结果：通过研究确定了怀地黄中糖类指标性成分的含量测定方法：
( 1 )多糖及小分子总糖采用紫外分光光度法进行测定,两种成分在 20.02~70.07μg(R2=0.9995)范围内呈良好的线性关系。其平均回收率为 96.94%,RSD为3.32%；(2)同时采用RP-HPLC-RID法对怀地黄中低聚糖成分进行含量测定,色谱条件为：色谱柱： Agilent Zorbax NH2 (4.6×250 mm,5μm)；流动相：乙腈-水(70：30)等度进行洗脱；柱温：30 ℃；流速：1 mL﹒min-1。RID 色谱条件：内部温度30 ℃；理论塔板数按蔗糖计算不低于2200。鲜地黄中葡萄糖、蔗糖、棉籽糖、水苏糖分别在1.50~15.00μg(R2=0.9999)、25.20~92.40μg(R2=0.9999)、1.50~15.00μg(R2=0.9999)、110.30~523.93μg(R2=0.9998)范围内呈良好的线性关系。其平均加样回收率分别为：96.41%、98.40%、97.34%、99.10%, RSD分别为 1.27%、1.63%、1.37%、1.08%；生地黄中葡萄糖、蔗糖、棉籽糖、水苏糖分别在1.50~15.00μg(r2=0.9999)、25.20~92.40μg(R2=0.9999)、8.30~49.80μg (R2=0.9995)、41.35~144.73μg(R2=0.9999)范围内呈良好的线性关系。其平均加样回收率分别为96.58%、97.49%、99.38%、100.13%,RSD分别为1.38%、1.13%、1.51%、1.74%。结果表明,以上所建立的测定方法简便易行,重复性良好；(3)初步建立了怀地黄鲜品及生品的HPLC指纹图谱,方法考察各项指标均符合要求,鲜地黄获得了10个共有峰,指认了其中5个色谱峰,生地黄获得了12个共有峰,指认了其中6个共有峰,分别建立相关共有模式,各相关系数均在0.9以上,进而初步建立了怀地黄HPLC指纹图谱及其质量评价方法。
结论：通过对怀地黄药材的系统研究,建立了地黄药材多种糖类指标性成分质控方法；对不同产地及不同品种怀地黄中指标性成分进行了含量测定,含量测定方法准确,可靠,稳定,快捷,为药材的种植提供了科学依据；所建立的怀地黄药材低聚糖部位的HPLC指纹图谱及其质量评价方法,可用于怀地黄药材的质量控制。