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禽类多瘤病毒(Avian polyomavirus，APV)，早期称鹦鹉幼雏病病毒(Budgerigar Fledgling Disease Virus，BFDV)。能引起多种鹦鹉雏鸟死亡的急性病毒性传染病。BFDV原属于乳多空病毒科多瘤病毒属。为了研究APV-1晚期基因多顺反子mRNA下游VP1基因的翻译调控机制,含AUG起始码的编码7个氨基酸的具有最佳翻译起始信号的核苷酸被设计插入到agno-1a mRNA的上游及AUG起始密码子的人工突变，以观察其对agno-1a mRNA下游VP1翻译的影响。本实验针对真核基因多顺反子mRNA的表达翻译的调控机制“Scan-Jumping及Internal Ribosome Entry Site (IRES)”模型，运用现代分子生物学方法在APV晚期基因中设计和构建基因组结构与野生型病毒APV-1相同的具有突变agno-1a区域的新型重组病毒。如片段插入（多重ATG区域叠加）碱裂解法提取APV cDNA克隆pHL1003DNA经Acc I部分酶切后回收全长线性目的片段，将合成的agno插入片段磷酸化后与目的片段用T4连接酶连接得到重组质粒,然后验证得到APV-1突变cDNA克隆；点突变（ATG→ACG或CTG，关键蛋白结合位点改变，关键RNA二级结构双链形成部位）pHL1003DNA经Acc I部分酶切和NcoI酶切后通过PCR技术将agno-1a区域基因的起始密码子ATG突变为ACG和CTG两种cDNA克隆并经测序验证。分别制备质粒DNA，经磷酸钙法介导单基因和多基因共转染鸡胚成纤维细胞（CEF），利用Western blot检测重组病毒的基因表达和观察目的蛋白的异同，分析和研究多顺反子mRNA的表达翻译的调控过程。本研究旨在通过研究禽类多瘤病毒（Avian Polyoma Virus，APV）晚期基因多顺反子翻译调控分子机制，了解真核基因多顺反子mRNA表达翻译的复杂过程及其调控机理和建立具复制能力的感染性cDNA的重组病毒及转染和感染鸡胚成纤维细胞系统。由于禽类多瘤病毒能引起幼雏急性致死性疾病和其它鸟类的急性或慢性疾病，为防止禽类多瘤病毒病的大面积传播，减少重大经济损失，有必要在国内不同禽类中进行禽类多瘤病毒感染的流行病学调查，据此开展重点防治并开发安全的基因工程疫苗。该研究可以提供制备基因工程疫苗的理论指导并进行基因工程疫苗初期研制；与家禽养殖场和兽医站联合，建立该病规范化的疫情监测方法和系统。