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贡嘎蝠蛾是冬虫夏草的优势寄主,其幼虫被虫草菌侵染后形成虫菌复合体,称之为冬虫夏草,它是中国特产传统名贵中药材,具有补肺益肾、止血化痰等重大药用和保健功能。贡嘎蝠蛾生活在高海拔草甸土中,近年来因为人类对自然环境的破坏,同时在商业利益的驱使下不计后果的采挖,导致这一名贵中药材的自然资源严重枯竭,为了满足人们对冬虫夏草的需求,人工饲养冬虫夏草宿主的方式逐渐被采用,但幼虫成活率低且生长发育不良成为制约规模化养殖幼虫的瓶颈。本实验室通过常规培养方法和分子生物学鉴定法相结合的手段,从贡嘎蝠蛾幼虫肠道内筛选到一株优势细菌Carnobacterium sp.(肉杆菌Hg4-03),并成功分离培养。本研究通过在贡嘎蝠蛾幼虫食物中添加该优势细菌,检测幼虫取食后生长发育以及肠道主要消化酶活性的变化,同时分析添加优势菌后幼虫肠道菌群多样性的改变,从而研究优势菌Hg4-03对蝠蛾幼虫生长发育和生理生化的影响,希望能找出一种通过微生态制剂以改良贡嘎蝠蛾幼虫养殖效率,为人工培育冬虫夏草提供技术支持。研究获得以下主要结果:①向贡嘎蝠蛾幼虫食物中添加两种不同浓度的优势菌-肉杆菌Hg4-03 28d后计算幼虫的体重增长率和死亡率。结果显示,添加肉杆菌Hg4-03菌饲喂幼虫后,幼虫的体重增长率(T-2: 52.06%; T-1: 51.53%)相对于对照组(C-1: 39.29%)明显提高,而死亡率则显著下降(T-2: 15.63%; T-1: 18.75%; C-2:28.13%; C-1: 32.26%)。同时,饲喂的幼虫添加的Hg4-03菌浓度越高,幼虫的增长率也有升高的趋势,但两个浓度试验组之间没有显著差异。②饲喂肉杆菌Hg4-03后分别于14d和28d后解剖幼虫,取出肠道,加入无菌水后匀浆,高速离心后取上清,作为粗酶液,利用考马斯亮蓝的方法测定粗酶液的总蛋白含量,利用福林—酚法测定肠道蛋白酶活性,利用3,5-二硝基水杨酸法测定肠道淀粉酶、纤维素酶和海藻糖酶活性。从检测结果可以看出,添加肉杆菌Hg4-03菌饲喂的幼虫肠道消化酶活性有显著性提高,其中蛋白酶活性与淀粉酶活性增幅最大,纤维素酶活性也有一定提高,但海藻糖酶活性则无明显变化。③示采用基于16S rDNA基因的DGGE方法,以14d和28d后解剖的幼虫肠道细菌总DNA为模板,用细菌16S rDNA基因V3区含GC夹通用引物进行PCR扩增,将扩增得到的16S rDNA序列在变形梯度凝胶中电泳,回收基因片段,连接到PMD18-T载体中,然后将连接产物转化到大肠杆菌JM109中,采用M13载体引物检测阳性克隆,测序。以此计算各组幼虫肠道微生物香农-威尔指数,结果显示,饲喂肉杆菌Hg4-03后幼虫肠道菌群的多样性指数呈上升趋势,处理组幼虫肠道中肉杆菌Hg4-03含量增加,且处理组中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的量也明显增加,但两个不同浓度菌处理试验组之间差异不显著。以上研究结果显示,肉杆菌Hg4-03肉杆菌Hg4-03作为益生菌饲喂贡嘎蝠蛾幼虫有助于维持幼虫肠道菌群多样性平衡,这为贡嘎蝠蛾人工或半人工养殖提供了一定的参考价值。