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目的：血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的无序增殖是血管重塑后发生再狭窄的重要因素。RB/E2F通路系统和mTOR信号通路系统与细胞周期的调控和细胞的增殖有着密切的联系,RB和TSC2基因分别是两条通路的核心调控基因。本研究探索RB/E2F与mTOR信号通路系统与VSMC增殖过程的相关性；探索RB与TSC2基因双敲除后介导的协同效应对细胞增殖的抑制作用;探索活性氧自由基(ROS)是否为RB与TSC2基因双敲除介导的协同效应引起细胞增殖停止的机制。方法：1,体外培养VSMC,并施加血小板源性生长因子(PDGF-BB)干预,模拟VSMC在体内的增殖表型。2,运用RT-PCR,Wertern-Blot法检测施加PDGF-BB干预前后,RB/E2F和TSC2/mTOR通路系统靶基因表达水平的变化情况。3,慢病毒转染RB及TSC2基因,应用MTT法分别检测空载慢病毒组(为空载体对照组)、RB基因单独敲除组、TSC2基因单独敲除组、RB/TSC2基因双敲除组的细胞增殖水平。4,Brdu染色分别检测对照组、RB基因单独敲除组、TSC2基因单独敲除组、RB/TSC2基因双敲除组的DNA合成水平。5,检测对照组、RB基因单独敲除组、TSC2基因单独敲除组、RB/TSC2基因双敲除组ROS表达水平。6,施加NAC(氧自由基清除剂)干预后,应用MTT法分别检测对照组、RB基因单独敲除组、TSC2基因单独敲除组、RB/TSC2基因双敲除组的细胞增殖水平。结果：1,在施加PDGF-BB影响因子后,RB/E2F信号系统的下游靶基因CCNA2和CDK1表达水平增加了8倍,mTOR信号通路系统的下游基因s6k的蛋白表达水平有明显的升高。2,RB基因单独敲除组、TSC2基因单独敲除组的细胞增殖水平较对照组有明显提高,而RB/TSC2基因双敲除组的细胞增殖水平较对照组则出现明显的降低。3,RB基因单独敲除组、TSC2基因单独敲除组的DNA合成水平较对照组有明显提高,而RB/TSC2基因双敲除组的DNA合成水平较对照组则出现显著的降低。4, RB/TSC2基因双敲除组ROS表达水平显著高于对照组,而对照组、RB基因单独敲除组、TSC2基因单独敲除组的ROS水平相差不大。5, RB/TSC2基因双敲除组的增殖水平在施加NAC干预后显著回升,与对照组(空载慢病毒组)、RB基因单独敲除组、TSC2基因单独敲除组的增殖水平相差不大。结论：本研究发现,RB/E2F和mTOR信号通路系统参与VSMC增殖的过程之中,并具有重要的作用。RB和TSC2分别作为两条通路的核心调控基因,双敲除RB/TSC2基因介导的协同作用显著的抑制了VSMC的增殖水平。而两条通路的开放代谢产生了大量的未清除的ROS,ROS的堆积则是抑制VSMC增殖的主要原因。