[目的]心脑血管疾病是全球范围内排列最靠前的致死性疾病之一。风湿性心脏瓣膜病和缺血性心脏病是心脏相关疾病中最常见的两类疾病。近年来人们对小RNA的研究日渐增多,miRNA参与调控机体代谢过程和在发病机制中的作用已经成为共识和研究热点。然而miRNA在两种心脏疾病中的表达谱,表达方式以及如何参与或调控过程还不清楚。本研究将通过miRNA高通量测序,组织病理检测,并结合分子生物学手段综合评价miRNA在两类心脏病变中病变中的调控作用,并试图通过红花黄色素探索其对缺血再灌注损伤的治疗效果和原理。[方法]1.收集正常人和心脏瓣膜病患者血清,并提取miRNA做高通量测序(HiSeq deep sequencing),与先天性心脏瓣膜病以及正常人进行对比。2.使用miRDeep2与Piano进行小RNA筛选,选择个别特异的miRNA进行Q-PCR验证。3.采用RNAhybrid、miRanda与TargetScan预测靶基因,miRNA与预测的靶向mRNA的靶向关系通过双荧光素报告体系进行验证,二尖瓣中IL1β和IL1R1的表达水平通过免疫组化和weatern blot进行检测和评估。4.采用GO与KEGG对其进行功能富集。5.收集PCI患者术前与术后的血液样本。6.采用Langendorff离体心脏灌流系统进行离体心脏缺血再灌注。先经历一次30min缺血,然后再进行20到60分钟灌注。7.采用体外培养的心肌细胞,对其进行缺氧缺糖处理模拟心脏局部缺血过程,并在处理后给予恢复培养模拟再灌注过程。8.通过慢病毒在心肌细胞中增加或降低miR-205-3p的含量。9.加入红花黄色素对动物模型和细胞模型进行干预处理。10.观察并测量患者、动物模型以及细胞模型中miR-205-3p与IL-1b以及其余各种炎症因子的改变。[结果]1.血清microRNA测序结果显示在四个风湿性心脏瓣膜病患者瓣膜中有13个miRNA的表达比对照组呈现一致的上调,有91个miRNA呈现一致的下调。2.Q-PCR验证的表达趋势与测序结果一致。3.用Targetscan靶向预测结果显示miR-205-3p和hsa-miR-3909分别靶向IL-1b和IL-1R1的3’UTR区。双荧光素酶报告分析验证了miR-205-3p和hsa-miR-3909 对 IL-1b 和 IL-1R1 的靶向关系。4.对来自瓣膜置换术中的二尖瓣组织进行免疫组化和western blot检测,检测结果显示来自风湿性心脏病患者的二尖瓣组织中IL-1b和IL-1R1表达水平高于来自先天性心脏病患者的瓣膜组织。5.当心肌组织或细胞发生缺血再灌注损伤时,miR-205-3p与1L-1b同步升高,通过慢病毒转入anti-miR-205-3p抑制miR-205-3p表达时,1L-1b含量也随之下降。6.红花黄色素可以抑制pre-miR-205-3p对细胞的损伤,使IL-1b水平下降。7.红花黄色素预处理可以很好地维持LVDP,并使LVEDP的升高值显著低于对照组,同时减少心肌梗死面积。8.红花黄色素能够阻止由于缺血再灌注性损伤中NLRP3和ROS水平的升高减少caspas1p10分泌。[结论]1.风湿性心脏瓣膜病变患者血清miR表达谱较之正常人血清miR表达谱发生了明显变化。风湿性心脏瓣膜病变患者血清中hsa-miR-205-3p和hsa-miR-3909表达下调有利于瓣膜组织中IL-1b和IL-1R1的表达上调,而风湿性心脏瓣膜病变组织中IL-1b和IL1R1表达上调揭示了风湿性心脏瓣膜病急性期过后乃至数年依然存在慢性炎症反应。2.miR-205-3p对1L-1b具有调控作用。3.红花黄色素能够减轻缺血/再灌注,其机制可能与抑制miR-205-3p下调1L-1b有关.4.红花黄色素还具有强大的抗炎、抗氧化作用,维持LVDP,延缓LVEDP的升高值程度,减少梗死面积,具有较理想的药用价值。