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目的:探讨AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒对肝癌细胞株Hep G2细胞迁移和侵袭能力的影响及其相关分子机制。方法:将培养的Hep G2细胞随机分为A、B、C、D、E五个组,其中A组为未予任何处理的Hep G2细胞对照组(未处理组),B组为用含空质粒的PLGA纳米粒处理的对照组(空白组),C、D和E组分别为用5μg/ml(低浓度)、10μg/ml(中浓度)和15μg/ml(高浓度)AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒处理的实验组。1 AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒对Hep G2细胞迁移和侵袭的影响1.1采用细胞划痕实验检测不同浓度AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒处理Hep G2细胞后对其迁移能力的效应作用。1.2采用Transwell小室实验检测不同浓度AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒处理Hep G2细胞后对其侵袭能力的效应作用。2 AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒抑制Hep G2细胞迁移和侵袭分子机制的初步研究2.1 AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒处理Hep G2细胞24h后,利用RT-PCR方法检测AFP和Rho C分子m RNA转录情况。2.2 AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒处理Hep G2细胞24h后,利用ELISA法检测AFP和Rho C蛋白水平表达情况,用Western Blot法检测Rho C蛋白水平表达情况。结果:1 AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒对Hep G2细胞迁移和侵袭的影响1.1划痕实验结果表明,未处理组与空白组细胞在划痕24h后,划痕宽度分别为308.62±5.89μm和298.28±5.74μm,两者之间差异没有统计学意义(P>0.05)。实验组细胞经不同浓度AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒作用后的划痕宽度值明显高于对照组(实验组纳米粒浓度由低到高其划痕宽度值分别为383.47±6.87μm、401.01±4.25μm、415.29±11.93μm),差异有显著统计学意义(P<0.001)。提示AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒对Hep G2细胞迁移能力有抑制作用。1.2 Transwell小室实验结果表明,未处理组与空白组细胞在Transwell小室中穿透膜的细胞数分别为70.67±1.16/视野和66.67±2.08/视野,两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。而实验组与未处理组和空白组相比,穿透膜的细胞数(纳米粒浓度由低到高穿透膜的细胞数分别为62.00±3.61/视野、59.33±1.53/视野和53.33±2.08/视野),经统计学处理,差异有高度显著性(P<0.001)。表明AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒对Hep G2细胞侵袭能力有抑制作用。2 AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒抑制Hep G2细胞迁移和侵袭分子机制的初步研究2.1 AFP和Rho C分子m RNA转录水平2.1.1 AFP分子m RNA转录水平经灰度分析结果显示,未处理组和空白组Hep G2细胞AFP m RNA灰度值分别为1.00±0.03和1.05±0.08,二者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组(纳米粒浓度由低到高)细胞AFP m RNA灰度值低于对照组(分别为0.93±0.07、0.68±0.04和0.57±0.03),低浓度组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),中、高浓度组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。2.1.2 Rho C分子m RNA转录水平经灰度分析结果显示,未处理组和空白组细胞Rho C m RNA灰度值分别为1.02±0.04、1.03±0.07,二者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组(纳米粒浓度由低到高)细胞Rho C m RNA灰度值明显低于对照组(分别为0.42±0.04、0.38±0.02和0.38±0.02),差异有显著统计学意义(P<0.001)。2.2 AFP和Rho C的蛋白表达2.2.1 ELISA检测AFP结果显示,未处理组与空白组细胞AFP的蛋白浓度分别为2.40±0.25、2.51±0.31,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组(纳米粒浓度由低到高)细胞AFP蛋白浓度值低于对照组(分别为2.01±0.21 ng/ml、1.01±0.11 ng/ml、0.49±0.07ng/ml),差异有统计学意义(P<0.05)。2.2.2 ELISA检测Rho C结果显示,未处理组与空白组细胞Rho C的蛋白浓度分别为98.76±3.04pg/ml、100.75±4.19pg/ml,二者差异无统计学意义(P>0.05)。实验组(纳米粒浓度由低到高)细胞Rho C蛋白浓度值显著低于对照组(分别为86.63±2.60pg/ml、47.37±2.51 pg/ml、39.78±2.47 pg/ml),差异有显著统计学意义(P<0.001)。2.2.3 Western Blot检测Rho C结果显示,未处理组与空白组细胞Rho C灰度值分别为1.02±0.05、1.02±0.03,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组(纳米粒浓度由低到高)细胞Rho C灰度值低于对照组(分别为0.85±0.01、0.70±0.02、0.62±0.02),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒对Hep G2细胞的迁移和侵袭能力有抑制作用。该AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒可下调AFP和Rho C分子的表达。