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用干扰素诱导剂poly(I)/(C)诱导鸡胚成纤维细胞,提取细胞总RNA,通过RT-PCR方法扩增了北京白鸡Mx基因全长编码区序列。序列分析表明:该基因编码区长2118 bp,编码705个氨基酸残基;其第631位为天冬酰胺,可推断:克隆的Mx基因具有抗病毒活性分子特征和特征性功能结构。将克隆的北京白鸡Mx基因由T载体亚克隆至经改造后的pcDNA6.2/EmGFP真核表达载体,命名为pcDNA6.2/EmGFP-Mx,并转染MDCK细胞,转染12h后,H5N1亚型禽流感病毒感染细胞,在不同时间点收集细胞培养上清。HA结果表明pcDNA6.2/EmGFP-Mx质粒能抑制禽流感病毒在MDCK细胞中的增殖,其抑制能力为75.0%;定量RT-PCR检测到pcDNA6.2/EmGFP-Mx质粒在MDCK细胞内对PB2基因的复制抑制率12h和24h分别为74.41%和72.99%,而对照质粒对PB2基因没有抑制作用。以SmaI、NruI酶切质粒pcDNA6.2/EmGFP-Mx,胶回收5kb线性化显微注射用基因片断,通过显微注射方法制备转基因小鼠。对新生小鼠通过基因组DNA PCR、Southern blot、RT-PCR和观察GFP表达进行鉴定获得阳性鼠。将阳性鼠与正常ICR小鼠进行交配获得F1代半合子转基因小鼠。结果显示G0代小鼠PCR检测13只整合阳性,阳性率44.83%;Southern blot检测3只整合阳性,阳性率10.34%。G0代转基因小鼠将外源基因遗传给后代的机率低于50%,推测G0代转基因小鼠为嵌合体;RT-PCR检测GFP和Mx基因mRNA在转基因小鼠各组织内均有表达,但荧光显微镜观察转基因小鼠GFP表达比较弱。我们成功制备了鸡Mx基因转基因小鼠,并且进行了传代建系。利用质粒pcDNA6.2/EmGFP-Mx,通过BP/LR反应,将EmGFP-Mx表达框整合重组到产毒质粒pLenti6/V5-DEST中,构建了重组Mx基因的慢病毒质粒pLenti6/EmGFP-Mx。通过与慢病毒包装质粒共转染293FT细胞系制备了重组慢病毒颗粒,将其感染NIH3T3进行滴度测定,病毒滴度约为5.0×104TU/mL;RT-PCR检测慢病毒感染细胞中Mx基因的表达,结果表明目的基因Mx已经被有效地转移到NIH3T3细胞系中。这种病毒能够感染哺乳动物细胞,说明建立的慢病毒表达系统是有效的,应用其可以生产有感染力的慢病毒颗粒,进行Mx基因的转移。