斑点免疫金渗滤法检测猪细小病毒的研究

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采用同步接种的方式,在PK-15细胞上增殖PPV,并用离心、PEG-6000沉淀法纯化、浓缩了PPV细胞培养液近52倍,测得病毒蛋白的含量为1.5mg/ml,以1:2.5的比例加入白油佐剂制备出免疫原,采用注射剂量递增的方式免疫家兔,五免后获得高免血清,经琼扩试验检测抗体水平在1:64以上,使用盐析、凝胶过柱、透析等方法提取IgG,测其蛋白含量为9.69mg/ml。用柠檬酸三钠还原法制备出了金颗粒直径为18~20nm的胶体金,标记提纯的兔抗PPV IgG后,初步建立了一种以NC膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测PPV的斑点免疫金渗滤法(DIGFA),并确立了最佳试验条件。该法对纯化PPV的最小检测量为5.86ng/点,其敏感性为HA试验的100倍,特异性试验表明DIGFA不与PRV、PRRSV、PK-15细胞液、猪瘟组织以及正常猪的肝、肾组织发生交叉反应。
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