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目的： 1.初步探讨体外培养的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(Rheumatoid Arthritis Synovial Fibroblasts,RASFs)中是否存在自噬现象及自噬在RA中的发病机制。2.RASFs在不同浓度的甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)作用24小时后,分别在蛋白和基因水平测定自噬标记物微管相关蛋白1轻链3(Microtuble-associated Protein1 light chain3,LC3)和P62的表达水平,初步探讨MTX对RASFs中自噬水平的影响。方法:分别收集膝关节置换的8例类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)患者和5例骨关节炎(Osteoarthritis,OA)患者的滑膜组织,用酶消化法消化后进行培养,加入不同浓度的MTX作用24小时后,利用蛋白质印记法(Western-blotting,WB)检测LC3蛋白、P62蛋白的表达水平;实时定量反转录-聚合酶连反应(RT-q PCR)方法检测LC3mRNA、P62m RNA的表达水平;利用透射电镜检测自噬体。结果： 1.WB结果:LC3蛋白、P62蛋白在RASFs和OASFs中均有表达,RASFs空白组与OASFs空白组相比,LC3蛋白表达增加、P62蛋白表达下降。在RASFs组,随着药物浓度的增加LC3蛋白表达下降、P62蛋白表达增加。2.RT-q PCR结果:LC3m RNA、P62m RNA在RASFs和OASFs中均有表达。RASFs空白组与OASFs空白组相比,LC3m RNA表达增加、P62m RNA表达下降。RASFs中药物处理各组与空白组相比无明显差异无统计学意义。3.透射电镜结果:在RASFs和OASFs中均可以检测到自噬体的形成。结论： 1.RASFs中自噬水平升高;2.RASFs饥饿24小时后自噬水平明显下降;3.MTX能抑制RASFs自噬,且随着药物浓度增大,抑制作用增强。利用自噬抑制剂治疗滑膜增生有望成为可能。4.MTX对RASFs中LC3m RNA、P62m RNA的表达无影响。