PH-START1对拟南芥生长发育的调控作用

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植物的生长发育是一个开放系统。首先,种子萌发形成幼苗,又不断发育形成新的器官,如根、茎、叶、花、果实、种子,它们都是植物特定发育阶段的产物。植物的营养生长转向生殖发育是植物生长到一定阶段后才完成的,对于多数植物来讲,其调控过程非常复杂。  PH-START1(At2g28320)是拟南芥START(the lipid/sterol-binding StAR-related lipid transfer protein domains)结构蛋白家族成员,已知含有START结构域的蛋白在植物生长发育过程中起着重要作用。PH-START1除含有START结构域外,还含有PH结构域,在调控植物生长发育方面的功能未知。本文探究了PH-START1对拟南芥生长发育的调控作用,为阐明和促控植物生长发育提供理论依据,主要结果如下:  1.PH-START1的表达模式分析  (1)Real-time PCR结果表明,PH-START1在拟南芥的根、叶、花、角果中都有表达,其中在幼苗期的根中表达量最多,在成苗期根中表达量逐渐减少;莲座叶中第6片莲座叶表达量最多,然后随着发育时间的延长逐渐减少;在花的发育过程中,随着花发育时间延长,PH-START1的表达量逐渐增多;授粉后3-5d的角果中PH-START1的表达量最高,然后表达量逐渐降低,到授粉后9d角果中PH-START1表达量又略有增加;花中,PH-START1在雄蕊中的表达量最高、其次是花瓣、萼片,在雌蕊中表达量最少。  (2)组织定位结果,PH-START1在拟南芥幼苗期根中表达量较高,在成株期的花药中PH-START1表达量较高。  (3)亚细胞定位结果,PH-START1主要定位在细胞质膜上。  2.PH-START1生物学功能分析  对PH-START1功能获得(过表达,OE)和缺失(T-DNA插入,ph-start1)的转基因拟南芥表型进行观察,分析PH-START1在调控拟南芥生长发育中的功能,发现:  (1)PH-START1对营养生长具调控作用。过表达PH-START1拟南芥营养生长受到明显的抑制,地上部株型矮小、茎细弱、叶片明显变小,地下部根系发育也受到明显的抑制;PH-START1表达量下降会促进拟南芥的生长发育。  (2)PH-START1对生殖生长具调控作用。过表达PH-START1拟南芥花序花蕾数明显减少;ph-start1的花蕾数略有增加;过表达PH-START1拟南芥的花瓣对称性减弱,雄蕊仅剩4个长雄蕊,2个短雄蕊发育受阻;ph-start1中花瓣也存在不对称性,2个短雄蕊的发育增强;过表达PH-START1拟南芥角果明显短小,果荚内种子排列稀疏散乱,种子数目和百粒重减少,干瘪、畸形,萌发率极低;ph-start1角果变大,种子排列整齐,种子数目和百粒重增加,种子饱满,形状规则,正常萌发。  (3)PH-START1对花粉发育具调控作用。过表达PH-START1拟南芥花中雄蕊的花粉囊发育畸形,花粉粒内容物减少,呼吸强度和淀粉含量明显降低,精细胞核发育受抑制,花粉的萌发和花粉管的伸长均受到抑制。  (4)PH-START1对种子发育具调控作用。过表达PH-START1的拟南芥,种子胚发育异常,授粉后3-5d与野生型胚发育相似,能正常形成球形胚和心形胚,但授粉后7-8d不能像野生型一样形成鱼雷形胚和马蹄状的子叶胚,在授粉后9d种子中没有成熟的胚;ph-start1种子的发育过程较野生型延迟,种子能形成成熟的胚。  3.PH-START1调控种子发育的分子机制  为明确PH-START1调控种子发育的分子机制,本研究对PH-START1与种子发育3条调控途径(IKU途径、泛素化途径、转录因子调控途径)中关键基因的调控关系进行了分析,结果发现过表达PH-START1会抑制IKU途径中SHB1、MINI3、IKU2的表达,诱导泛素化途径中DA1的表达,抑制转录因子途径中TTG2、AP2基因的表达,说明PH-START1对3条调控种子发育的途径均有重要的调控作用。
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