论文部分内容阅读
铬是生物体必需的微量元素,具有很多生物学功能。GTF(葡萄糖耐量因子)是一种能维持动物血液中葡萄糖水平正常的物质,铬是保持GTF活性的必要成分。但是无机铬的吸收率底、毒性大。酵母菌对微量元素具有很强的吸附作用,可以作为微量元素良好的载体,将无机铬转化成有机铬,提高铬在机体内吸收利用率,降低其毒副作用,且酵母本身含丰富的蛋白质和B族维生素,是一种良好的微生物蛋白饲料营养源。所以,获得高产富铬酵母的关键就在于拥有一株好菌株。本实验就是经N+注入并辅以紫外线复合诱变处理,筛选高产突变株,并确定制备富铬酵母的最佳条件。实验以热带假丝酵母(Candida tropicalis)1254为出发菌,低能离子束诱变参数是能量20Kev,剂量0～20×2.6×1014N+/cm2,结合铬浓度剃度平板筛选法,得到耐铬能力较强的菌株Y-6。结果显示:生物量和铬含量分别由原来的0.525ug/100mL、562ug/g提高到0.905ug/100mL、829ug/g。变异菌株Y-6经传5代培养,生产性能稳定。利用单因素试验摸索出了Y-6最佳培养条件:最佳培养基为:1%酵母粉、1%蛋白陈、2%麦芽糖、蒸馏水配制,培养基含铬量800ug/mL、初始pH5.0、10%接种量、培养温度30℃、培养24h,制备富铬酵母效果最佳,此项富铬酵母制备技术为工业化生产奠定了基础。N+注入可能是一种有效的富铬酵母选育方法。通过对N+注入酵母细胞的生物学效应研究发现:离子束对酵母细胞有直接刻蚀损伤作用,菌体成活率随注入剂量的增加呈先降、后升、再降的“马鞍型”变化关系。SEM观察发现,未经N+注入的细胞较为完整、饱满且表面光滑,而经注入后的细胞表面粗糙,可见明显的刻蚀损伤和破壁现象,并且注入剂量越大,伤痕也越深宽。在培养过程中,经平板单菌落和显微镜观察,发现离子注入后的酵母菌落和细胞形态与原始菌比较,均有明显的变化。本实验对富铬酵母中有机和无机铬进行测定,发现筛选菌株Y-6有机铬含量达94.6%,而出发菌的有机铬含量是85%。紫外光谱分析,高铬酵母在260 nm处有特征吸收峰;用氨基酸自动分析仪对高铬酵母中的17种氨基酸含量进行分析,证实富铬酵母中的氨基酸含量大多高于普通酵母,尤其是赖氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等人体必需氨基酸的含量明显提高