骨髓自噬相关蛋白P62、Beclin 1、LC3B与再生障碍性贫血中医证型的相关性研究

来源 :山东中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:evaclamp
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目的:测定再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA,再障)患者骨髓单个核细胞端粒长度(TEL)及自噬相关蛋白P62、Beclin1、LC3B表达水平,并研究再障中医证型与骨髓单个核细胞端粒长度、P62、Beclin1、LC3B表达水平的相关性,以进一步探求自噬与AA发病的关系。并分析外周血淋巴细胞免疫分型与端粒长度、P62、Beclin1、LC3B表达的相关性,从而探究自噬与AA免疫异常的相关性。方法:本研究收集AA患者79例,中医辨证分型分为:急痨髓枯证21例,肾阳虚证19例,肾阴虚证19例,肾阴阳两虚证20例。并收集24例正常人骨髓单个核细胞做对照组。运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)检测患者与正常组骨髓单个核细胞端粒长度、P62、Beclin1、LC3B mRNA表达水平。探讨AA患者中医证型与骨髓单个核细胞端粒长度、P62、Beclin1、LC3B mRNA表达水平的相关性。并研究AA患者骨髓单个核细胞端粒长度、P62、Beclin1、LC3B之间的相关性。研究CAA、SAA患者端粒长度(TEL)与P62、Beclin1、LC3B mRNA表达水平与外周血CD8+、CD4+、T淋巴细胞百分比的相关性。结果:1.CAA患者与SAA患者端粒长度较正常对照组明显降低;CAA患者与SAA患者P62 mRNA表达水平较正常对照组明显升高;CAA患者与SAA患者Beclin 1 mRNA表达较正常对照组明显降低;CAA患者与SAA患者LC3B mRNA表达较正常对照组明显降低,且SAA患者较CAA患者LC3B mRNA的表达降低,以上结果均具有统计学意义。2.端粒长度在肾阴虚证、肾阴阳两虚证、急痨髓枯证患者端粒长度表达水平较肾阳虚证组降低,各组表达水平均低于正常对照组的表达水平,有统计学意义;肾阴虚证、肾阴阳两虚证、急劳髓枯证患者P62 mRNA的表达水平较肾阳虚证组升高,肾阴阳两虚证患者P62 mRNA的表达水平较肾阴虚证组升高,各组表达水平均高于正常对照组的表达水平,有统计学意义;肾阴虚证、肾阴阳两虚证、急痨髓枯证患者Beclin1、LC3B mRNA的表达水平较肾阳虚证组降低,各组表达水平均低于正常对照组的表达水平,有统计学意义。3.端粒长度与P62 mRNA表达水平呈负相关(R=-0.384,P<0.05),端粒长度与LC3B mRNA表达水平呈正相关性(R=0.315,P<0.05)。P62与Beclin1、LC3B mRNA表达水平均呈负相关性(R=-0.365 R=-0.913,P<0.05)。4.CAA组较SAA组患者外周血T淋巴细胞百分比低,CAA组较SAA组患者外周血CD8+%低,CAA组较SAA组患者外周血CD4+百分比与CD4+/CD8+比值差异没有统计学意义。端粒长度(TEL)表达与T淋巴细胞百分比、CD8+百分比、CD4+百分比呈负相关性;P62 mRNA表达水平与T淋巴细胞百分比、CD8+百分比、CD4+百分比之间呈正相关性;Beclin1、LC3B mRNA表达水平与T淋巴细胞百分比、CD8+百分比之间呈负相关性。结论:1.自噬相关蛋白P62、Beclin1、LC3B及端粒均可参与AA的发病,且P62高表达、LC3B低表达可能与端粒长度具有相关性。2.端粒长度缩短在AA发病和疾病进展中起重要作用,急劳髓枯组表达最低,急劳髓枯患者端粒损耗更多。3.P62在AA患者骨髓中表达增高,且在急痨髓枯组中表达最高,提示细胞内废物积累,自噬水平减低。Beclin1、LC3B在AA患者骨髓中低表达,急劳髓枯组中最低,提示自噬减低。4.端粒长度与P62 mRNA表达水平呈负相关,端粒长度与LC3B mRNA表达水平呈正相关性。P62与Beclin1、LC3B mRNA表达水平均呈负相关性。5.AA患者端粒长度(TEL)与P62、Beclin1、LC3B mRNA表达水平与外周血CD8+、CD4+、T淋巴细胞有相关性。
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