华支睾吸虫泛素偶连酶和磷酸甘油酸变位酶的功能研究

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本文从华支睾吸虫成虫cDNA文库和大规模测序的结果中,选取了两条基因:泛素偶连酶和磷酸甘油酸变位酶作了进一步研究。泛素—蛋白酶体系统是真核生物中蛋白降解的重要机制。生物信息学分析结果表明该蛋白的氨基酸序列与人的E2酶HHR6A和HHR6B有77﹪的一致性。将此cDNA的编码框部分克隆至载体pGEX4T1中,转化大肠杆菌,以GST融合蛋白形式进行了表达。表达的蛋白以thrombin酶切并纯化。纯化的蛋白进行酶活测定的结果表明,无论是否存在辅因子,此蛋白均可以催化3-磷酸甘油酸向2-磷酸甘油酸的转化。该酶最适反应温度为45℃,最适pH值为7.0,抑制实验表明矾酸钠可有效抑制CsPGM的活性。推测CsPGM有可能是一种兼有dPGM和iPGM活性的新类型的PGM。
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