苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是目前世界上应用范围最广的杀虫微生物，其杀虫活性主要来源于芽胞形成期产生的杀虫晶体蛋白。传统的Bt菌株均存在杀虫谱窄、毒力低等缺陷，因此，通过生物技术手段构建高效广谱的Bt工程菌一直是国内外研究的热点和方向。本研究利用Bt的cry1Ac基因与核型多角体病毒的p74基因构建融合基因，并获得新型杀虫工程菌株XBU-H1Acp74。　　 从苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californicamulticapsid nucleopolyhedrovirus，简称AcMNPV)中提取病毒DNA，设计引物p74-F/p74-R，以病毒DNA为模版PCR扩增p74基因；从研究室保存的菌株Bt4.0718(CCTCC No.M200016)中提取质粒，设计引物Ac-F/Ac-R和Act-F/Act-R，以质粒为模版PCR分别扩增cry1Ac基因及cry1Ac基因的终止下游序列cry1Act；以pMD18-T作为大肠杆菌亚克隆载体，分别构建含有目的基因p74、cry1Ac、cry1Act的T载体pTp74、pT1Ac和pT1Act；用SmaⅠ和NcoⅠ双酶切pTp74和pT1Act，回收两个酶切片段并进行连接，构建中间载体质粒pTp74Act；再分别用Sa1Ⅰ和Bg1Ⅱ双酶切pT1Ac和中间载体pTp74Act，回收两个酶切片段并进行连接，构建中间载体质粒pT1Acp74；然后将中间载体pT1Acp74和穿梭载体pHT304分别用Sa1Ⅰ和XmaⅠ双酶切，回收两个酶切片段并进行连接，构建表达载体质粒pH1Acp74，将表达载体pH1Acp74电转化至Bt无晶体突变株XBU001，获得目的重组菌株XBU-H1Acp74。　　 SDS-PAGE分析显示，工程菌株XBU-H1Acp74可表达130kD的Cry1Ac蛋白和50kD的P74蛋白；原子力显微镜观察显示，工程菌株XBU-H1Acp74可产生呈菱形的晶体蛋白；生测结果显示，工程菌株XBU-H1Acp74与普通工程菌HTX-42(cry1Ac单价基因转XBU001)相比，对初孵棉铃虫在48h的LC50是47.624μg/ml，72h的LC50是29.0782μg/ml，分别低于HTX-42在48h的116.4880μg/ml和72h的90.7526μg/ml，表明P74蛋白可以协同Cry1Ac的杀虫效果。　　 本研究成功构建了cry1Ac基因和p74基因融合的Bt工程菌，为进一步研究和构建新型生物杀虫剂的工程菌株，研制出高效、广谱、安全的杀虫剂提供了新的技术途径。