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目的我们前期的研究表明原癌基因c-erbB2存在于原始卵泡中,且用RNA干扰方法证实c-erbB2在原始卵泡启动生长中起重要作用。本研究进一步探讨原癌基因c-erbB2调控原始卵泡启动生长中有关的信号通路,分析c-erbB2与信号通路MAPK及PKC的上下游关系。方法1.选择前期研究抑制效果最佳的siRNA,用脂质体介导转染培养中的卵巢,用RT-PCR法检测原癌基因c-erbB2mRNA的表达,用western blot检测ErbB2蛋白、MAPK蛋白和PKC蛋白表达情况。2.用信号通路MAPK及PKC特异性的抑制剂PD98059和calphostin加入体外培养液,培养卵巢8d后检测c-erbB2mRNA及其蛋白的表达。3.siRNA转染卵巢后及加入信号通路抑制剂PD98059和calphostin培养8d后的卵巢,用组织切片和HE染色法观察原始卵泡启动生长情况。结果1. c-erbB2siRNA转染卵巢后,c-erbB2mRNA水平明显下调(P<0.05),ErbB2蛋白、MAPK蛋白和PKC蛋白的表达也明显下调(P<0.01)。2. PD98059和calphostin作用于体外培养的卵巢,原癌基因c-erbB2mRNA和蛋白的表达均无明显变化(P>0.05)。3. siRNA转染培养后的卵巢及加入PD98059和calphostin培养后的卵巢观察到:对照组8天后部分原始卵泡发育为初级卵泡,而siRNA组初级卵泡和次级卵泡数明显减少(P<0.01);抑制剂组原始卵泡数增多,次级卵泡数明显减少(P<0.05);结论1.c-erbB2siRNA转染卵巢后,在明显下调c-erbB2mRNA及ErbB2蛋白表达水平的同时,使MAPK蛋白和PKC蛋白表达明显下调,提示原癌基因c-erbB2可能通过MAPK和PKC途径参与调控原始卵泡启动生长过程。2.MAPK和PKC信号通路抑制剂对原癌基因c-erbB2mRNA和蛋白的表达无明显影响,表明c-erbB2可能是调控原始卵泡启动生长中的蛋白激酶MAPK和PKC的上游激活物。