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目前我国每年约有250万脑卒中患者,其中约70%~80%丧失生活自理能力。脑卒中患者多伴有程度不同的后遗症,包括运动障碍,言语障碍,学习、记忆、认知功能下降等。现代康复训练能有效促进脑卒中患者功能障碍的恢复,但耗费时间较长。针灸和中药在脑卒中后不同时期均可应用,但其作用机理一直未能被现代科学阐明。近年来,自噬是生物医药领域的研究热点,人们发现自噬和神经元损伤修复密切相关。那么,针刺结合疲劳转棒训练能否改善缺血性中风大鼠的功能障碍?其疗效是否与细胞自噬有关?具体的自噬机制为何?相关的研究正在展开。目的:本研究通过行为学和分子生物学方法,观察针刺靳三针头穴结合疲劳转棒康复训练对pMCAO大鼠运动功能和认知功能恢复的影响,并进一步探究其功能恢复的作用机制是否与细胞自噬有关,以期为临床治疗缺血性脑卒中患者提供科学的理论依据。方法:将88只大鼠随机分为3组,假手术组(sham)17只,模型组(model)25只,治疗组(treat)22只,余皆剔除。电凝法建立右侧永久性大脑中动脉闭塞(permanent Middle Cerebral Artery Occlusion,pMCAO)模型。治疗组针刺“智三针”、“颞三针”、“脑三针”,并结合疲劳转棒(Rota-rod)进行康复训练,每日针1次,训练3次,连续治疗6天休息1天,共治疗3周。在造模后第1天行网屏测试(Screen test),连续7天行神经功能评分(Neurological function score),第1、7、14、21天行爪印分析和疲劳转棒测试,第22~26天行水迷宫(Morris Water Maze,MWM)实验。各组在造模后第1天行脑切片TTC染色;在第1、21天用免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白beclin-1、LC3、p62的表达情况。采用SPSS 23进行统计分析处理。结果:TTC染色:假手术组无缺血,模型组和治疗组均有明显缺血,且两组缺血面积比较无明显差异(P=0.802)。网屏测试:假手术组评分均低于治疗组和模型组(均校正P ＜0.0005),而治疗组对比模型组无明显差异(校正P=0.462)。神经功能评分:假手术组连续7天0分;第6、7天,治疗组评分均低于模型组(均P<0.05)。爪印分析:①步长和步宽:在相同时间点,各组左前肢两两比较均无明显差异(均P>0.05),其余肢体的统计结果均与左前肢相同(均P>0.05);在相同时间点,左侧(患侧)与右侧(健侧)前肢比较,同组内均无明显差异(均P>0.05),后肢的统计结果与前肢相同(均P>0.05)。②足心距离:第1天,模型组和治疗组的左侧(患侧)足心距离均高于假手术组(均P<0.01);假手术组左侧(患侧)对比右侧(健侧)无明显差异(P=0.136),而模型组和治疗组的左侧均高于右侧(均P<0.05);第14天,治疗组的左侧足心距离低于模型组(P<0.05);第14、21天,治疗组左侧的足心距离均低于第1天(均校正P<0.05),呈明显的下降趋势;而模型组的下降趋势不明显(均校正P>0.05)。疲劳转棒:①转速:造模前1天,各组间无整体差异(P =0.990);造模后第1天,假手术组均高于治疗组和模型组(均校正P<0.0005),而治疗组对比模型组无明显差异(校正P=1);第7、14、21天,假手术组多高于治疗组和模型组(校正P<0.01),而治疗组均高于模型组(均校正P<0.05)。②持续时间:造模前1天,各组间无整体差异(P=0.945);造模后第1天,假手术组均高于治疗组和模型组(均校正P<0.0005),而治疗组对比模型组无明显差异(校正P=1);第7、14、21天,假手术组多高于治疗组和模型组(校正P<0.05),治疗组多高于模型组(校正P<0.05)。水迷宫:①潜伏期:第24天,假手术组和治疗组均低于模型组(均P<0.05);其余时间点,假手术组均低于模型组(均P<0.01),而治疗组对比模型组均无明显差异(均P>0.05)。假手术组和治疗组在第24、25天均低于第22天(均校正P<0.05),而模型组在第25天低于第22天(校正P=0.002)。②泳速:造模后第23天,假手术组高于模型组(P<0.05);其余时间点,各组间比较均无明显差异(均P>0.05)。③各象限活动的时间百分比:造模后第26天,假手术组和治疗组在Q3象限的活动时间百分比均高于其他象限(均校正P<0.01),而模型组在各象限的活动时间则无整体差异(P=0.940);假手术组和治疗组在Q3象限的活动时间百分比均高于模型组(均P<0.05)。④原平台区域的穿越次数:造模后第26天,假手术组和治疗组均高于模型组(均校正P<0.05)。Western blot:①第1天:各组间beclin-1的相对表达量比较,假手术组均低于模型组组和治疗组(均P<0.01),而模型组对比治疗组有一定程度的差异(P=0.135);各组间LC3-II/LC3-I的比值比较,假手术组低于模型组(P<0.05),而治疗组对比假手术组和模型组均无明显差异(P>0.05);各组间p62的表达比较,假手术组均高于模型组和治疗组(均P<0.05),而模型组对比治疗组无明显差异(P=0.842)。②第21天:各组间beclin-1的表达无明显整体差异(P=0.896);各组间LC3-II/LC3-I的比值比较,假手术组均低于模型组和治疗组(P＜0.05),而模型组对比治疗组无明显差异(P=0.663);各组间p62的表达比较,假手术组均高于模型组和治疗组(均P<0.01),而模型对比治疗组无明显差异(P=0.982)。③各组待测蛋白的相对表达量在两时间点的对比:假手术组beclin-1、LC3-II/LC3-I、p62分别在两时间点比较均无明显差异(P>0.05)。模型组beclin-1(P =0.055)、p62(P=0.058)分别在两时间点比较,相对表达量有一定程度的差异,而LC3-II/LC3-I在两时间点比较无明显差异(P=0.530);治疗组beclin-1(P=0.140)、p62(P=0.136)分别在两时间点比较,相对表达量有一定程度的差异,而LC3-II/LC3-I在两时间点比较无明显差异(P =0.559)。结论:1.pMCAO造模引起大鼠运动和认知功能下降。2.随着时间的推移,pMCAO大鼠能够自我修复部分运动和认知功能。3.针刺结合疲劳转棒训练能够改善pMCAO大鼠的行为学表现,可认为这种联合方案能够促进pMCAO大鼠运动和认知功能的恢复。4.pMCAO造模激活了大鼠海马组织的自噬,提高自噬体含量,且不影响自噬流的通畅。5.针刺结合疲劳转棒训练对pMCAO造模后大鼠海马组织中的自噬变化影响不明显,尚不能确定联合方案的作用机理与调节自噬有关。