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目的:糖尿病足是糖尿病患者严重的并发症之一,其发生的主要原因有血管病变、神经病变、感染、下肢动脉硬化缺血及局部微环境的异常等,常迁延不愈。目前导致其迁延不愈的机制尚不十分清楚。血小板源生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)只有与其受体特异性结合后才能发挥其在创面愈合中的作用,本研究通过观察糖尿病足创面和非糖尿病足创面肉芽组织中血小板源生长因子受体α(platelet derived growth factor receptorα,PDGFR-α)含量,进一步探讨糖尿病足创面迁延不愈的原因。方法:1根据纳入标准和排除标准,选取2015年1月至2016年6月于白求恩国际和平医院住院的糖尿病足溃疡患者10例,非糖尿病足溃疡患者10例,作为对照组。2两组患者于入院后均给予常规清创处理,时间为10-15天。创面准备完毕后取各组患者创面中的新鲜肉芽组织,并将取材的肉芽组织分为两份。一份经4%多聚甲醛溶液固定后,对标本进行HE染色和免疫组织化学染色观察。另外一份取材后立刻放入液氮中,使其迅速冷却,然后将组织标本迅速转移至-80℃冰箱中储存,用于Western blot分析和Real-time PCR检测。3在光学显微镜下(400×)观察两组HE染色切片中肉芽组织形态,并在每个HE染色切片上随机选取10个视野,计数每个视野中毛细血管数量,取其平均值进行统计,观察创面肉芽组织生长情况。4取上述石蜡切片进行免疫组织化学染色,对PDGFR-α表达情况进行定量分析。首先在光学显微镜下(400×)对PDGFR-α表达情况进行观察,镜下棕黄色或黄褐色颗粒代表PDGFR-α染色阳性。在每个染色切片上随机选择10个热点区域进行拍照,用数字医学图像分析系统(Motic Medical 6.0)对所选视野行PDGFR-α光密度值检测,取平均光密度值(optical density,OD),应用平均光密度值对PDGFR-α进行半定量分析。5应用Western blot分析在蛋白水平观察PDGFR-α表达情况。首先用Image J软件分析两组PDGFR-α条带灰度值,以GAPDH为内参照蛋白,结果以PDGFR-α与GAPDH条带灰度的比值来表示每个条带中PDGFR-α的相对表达量,对PDGFR-α进行蛋白定量分析。6应用Real-time PCR检测在基因水平观察PDGFR-α表达情况。对两组创面肉芽组织进行Real-time PCR检测,得到各目的基因表达相对定量值,即PDGFR-αm RNA表达量,对PDGFR-α进行基因定量分析。结果:1肉芽组织观察:肉眼观察糖尿病足创面和非糖尿病足创面肉芽组织,对照组肉芽组织新鲜,表现为肉芽组织鲜红色,如颗粒样生长,触感较湿润柔软,取材时出血明显。与对照组相比,糖尿病足组创面肉芽组织老化,表现为颗粒状生长不明显,触感较韧。2肉芽组织HE染色:在显微镜下观察两组HE染色切片,对照组创面肉芽组织可见毛细血管密集,大量成纤维细胞增殖。与对照组相比,糖尿病足组创面肉芽组织毛细血管较稀疏,成纤维细胞数量较少。对平均毛细血管数进行统计分析,糖尿病足组毛细血管数量较对照组明显下降(P<0.01)。3免疫组织化学染色切片镜下观察:两组均可见PDGFR-α表达阳性的棕黄色、黄褐色颗粒,其中对照组创面肉芽组织切片棕黄色颗粒数量较多,与对照组相比,糖尿病足组肉芽组织切片阳性表达的棕黄色颗粒显著减少。用平均光密度值代表PDGFR-α表达量,对PDGFR-α进行半定量分析,糖尿病足组创面肉芽组织PDGFR-α平均光密度值明显低于对照组(P<0.05)。4 Western blot分析结果显示:统计两组PDGFR-α与GAPDH条带灰度的比值,对PDGFR-α表达情况进行定量分析。对照组肉芽组织中PDGFR-α相对蛋白表达值是0.61±0.13,糖尿病足组肉芽组织中PDGFR-α相对蛋白表达值为0.33±0.10,糖尿病足组创面肉芽组织中PDGFR-α相对蛋白表达值低于对照组(P<0.01)。5 Real-time PCR检测结果显示:应用PCR检测两组创面肉芽组织PDGFR-α基因表达情况,对PDGFR-α基因表达相对定量值进行统计分析。对照组肉芽组织中PDGFR-α相对基因表达值是1.32±0.49,糖尿病足组肉芽组织中PDGFR-α相对基因表达值为0.79±0.16,糖尿病足组创面肉芽组织PDGFR-αm RNA含量明显低于对照组(P<0.01)。结论:1对照组创面肉芽组织增生明显,表现为大量毛细血管形成,并伴有大量成纤维细胞浸润;与对照组相比,糖尿病足创面肉芽组织中毛细血管数量较少,成纤维细胞散在分布,肉芽组织增生不良。2与对照组相比,糖尿病足组创面肉芽组织PDGFR-α含量明显下调,可能与糖尿病足形成机制,即血管、神经病变导致创面缺血缺氧有关,使PDGFR-α不能正常发挥其生物学作用,这可能是导致糖尿病足慢性创面迁延不愈的原因之一。