猪链球菌2型山东株的分离鉴定及其蜂胶灭活疫苗研制

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对山东某大型养猪场发生呼吸道感染并伴有神经症状的病猪脑组织进行了病原菌分离,对其优势菌进行菌落形态学观察、生化试验、PCR检测、药敏试验和毒株致病力试验,实验结果证实成功分离到一株猪链球菌2型强毒株,其含有目前已知的MRP、SLY、EF三种毒力基因,该菌株对昆明系小鼠的致病力为LD50=1.6×10~4CFU。对新西兰白兔的致病力为LD50=2.0×10~3CFU。本动物回归试验证实该菌株对断奶仔猪致死率为5/5。由该菌株制备了原始种子和基础种子批,并对其第1代、第9代和第13带的培养特性、免疫原性以及毒力进行了检测,确定了其作为基础种子的稳定性,建立了1-13代基础种子批,为其疫苗的研制和开发提供了基础种子资源。选取该菌株1-13代内的基础种子制备生产种子,进行了高密度发酵条件优化试验,对产业化高密度发酵生产工艺条件进行了优化研究,为猪链球菌抗原的产业化生产奠定了基础。制备了猪链球菌2型蜂胶灭活疫苗,对疫苗进行了无菌检验、安全检验、效力检验等相关检验,疫苗的无菌检验、安全检验合格,疫苗对仔猪的效力检验结果保护率为100%,疫苗对模型动物新西兰白兔的效力检验结果为70%。选用链球菌抗体阴性猪进行疫苗免疫,采用ELISA方法进行抗体检测,测定了其抗体消长规律,抗体水平维持在6个月以上,为该疫苗的的应用提供了可靠的依据。
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