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目的心肌纤维化是心脏老化的一个重要特征。衰老过程中发生的心肌纤维化可能与肾素—血管紧张素系统(RAS)及各种纤维化相关多肽水平的变化有关。RAS的效应分子之一血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)可通过多个环节影响着心肌纤维化的形成,其中很重要的一个机制就是它可以通过AT1受体刺激心脏成纤维细胞合成和分泌纤溶酶原激活物抑制剂—1(PAI-1),从而抑制胶原等细胞外基质(ECM)的降解,使胶原沉积增多。目前有研究证实:在衰老的大鼠心肌局部AngⅡ和PAI-1表达是增高的。而PAI-1在高血压所致的肾小球硬化、肺纤维化及肝硬化等疾病中的致纤维化作用已得到证实,但在老龄心肌纤维化中的作用还不很清楚。氯沙坦为AngⅡ—AT1受体拮抗剂,研究表明,氯沙坦能够抑制自发性高血压大鼠心肌纤维化的发展,但其是否能够抑制增龄所致心肌纤维化的研究国内外报道较少。本实验通过研究不同月龄大鼠心脏形态结构和PAI-1表达的变化,以及氯沙坦对老龄大鼠心肌纤维化的影响,探讨老龄大鼠心肌纤维化的发生机制,为预防和延缓增龄所致心肌纤维化及指导临床用药提供一定的理论根据。方法选取正常的Wistar大鼠30只,随机分成三组:青年鼠(3月龄)10只,老年鼠(20月龄)20只,随机分为老年对照组10只,老年氯沙坦组10只。氯沙坦(20mg/kg/d)溶于2-3ml蒸馏水中灌胃,用药10周。青年组和老年对照组给予相应剂量的蒸馏水灌胃10周。正常饲料喂养,饮水与活动均不限。10周末将大鼠腹腔麻醉后,分离左心室(含室间隔)并称其重量(LVW),除以体重(BW)得左室重量指数(LVMI)。将左心室心肌组织分为两部分:(1)取左心室中上段横切面组织一块制成石蜡包埋切片:①VG染色,显微镜下观察并摄片,使用图像分析系统进行半定量研究,通过灰度调节来区分胶原与非胶原成分,测量心肌胶原容积分数(CVF)、心肌血管周围胶原面积与管腔面积比例(PVCA)。计算方法:CVF=胶原面积/总面积,其中胶原面积不包括血管周围胶原面积。PVCA=壁内小动脉管腔周围胶原面积/动脉管腔面积。②PAI-1免疫组化染色半定量研究:SP法,切片在显微镜下观察并显微照相,应用计算机图像分析系统进行半定量分析,计算其阳性面积比。(2)羟脯氨酸浓度(HC)测量:制备心肌组织匀浆,碱水解法,取上清,应用分光光度计,550nm处测各管吸光度。羟脯氨酸浓度=[(测定管吸光度-空白管吸光度)÷(标准管吸光度-空白管吸光度)]×标准管含量(5μg/ml)×[水解液总体积(10ml)÷组织湿重(mg)]。对数据进行统计学分析,分别比较青年组与老年对照组、老年氯沙坦组和老年对照组之间CVF、PVCA、HC及PAI-1的变化,同时进行CVF、PVCA、HC与PAI-1的相关性分析。结果1.各组大鼠左室重量指数(LVMI)的比较:与青年组相比,老年对照组LVMI降低,且差异有统计学意义(P＜0.05)。老年氯沙坦组LVMI较老年对照组有降低的趋势。2.各组大鼠心肌HC,CVF和PVCA的比较:与青年组相比,老年对照组HC、CVF和PVCA均增高,有明显的统计学差异(均为P＜0.01);与老年对照组相比,老年氯沙坦组HC、CVF和PVCA明显降低,且差异具有统计学意义(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05)。3.各组大鼠心肌PAI-1免疫组化染色及半定量分析:PAI-1表达在老年对照组较青年组明显增强(P＜0.05);与老年对照组相比,老年氯沙坦组PAI-1表达减少(P＜0.05)。4.PAI-1与HC,CVF和PVCA直线相关分析:PAI-1表达与HC,CVF和PVCA呈正相关(r_s分别为0.693、0.738、0.672;P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01)。结论1.老年对照组HC、CVF和PVCA明显高于青年组,提示:随着增龄,老龄大鼠心肌胶原含量增加,异常聚积在心肌间质和血管周围,形成心肌纤维化。2.PAI-1表达在老年对照组较青年组明显增加,而且PAI-1与HC、CVF和PVCA呈明显的正相关,提示:PAI-1可能参与了增龄过程中老龄大鼠心肌纤维化的形成。3.用氯沙坦干预后的老年大鼠较老年对照组HC、CVF、PVCA及PAI-1表达均降低,提示:氯沙坦在一定程度上抑制了老龄大鼠心肌纤维化的形成,机制之一可能是抑制了PAI-1在心肌组织的表达。