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目的:对热应激预处理后的大鼠建立梗阻性黄疸模型,观察梗阻性黄疸大鼠的肾脏尿素氮和血清肌酐变化,研究热应激预处理对梗阻性黄疸大鼠肾功能的影响,寻找预防梗阻性黄疸术后急性肾功能衰竭的手段。
方法:将30只Wistar大鼠随机分为3组:胆总管结扎组(B组),假手术组(S组),热应激预处理+胆总管结扎组(H组)。3组均在乙醚开放麻醉下,腹部剃毛,用1%的碘伏消毒切口2次,经剑突下正中小切口进腹,游离出胆总管,胆总管结扎组于肝门部和其远端用6/0的丝线分别结扎胆总管,中间予以切断。腹部切口用4/0的丝线分两层缝合。其中假手术组接受同样手术,但只游离胆总管而不结扎胆总管,热应激预处理组在胆总管结扎手术前进行热应激预处理,具体方法为:将大鼠麻醉后置于42℃带鼓风装置的恒温干燥箱内,20分钟后取出,12小时后进行胆总管结扎手术。术后大鼠自由进食饲料和水,不予补液和抗生素治疗。术后1周处死大鼠,穿刺心脏取血2ml置于促凝管内,用全自动生化分析仪检测肝肾功能。观察肾脏组织病理改变并采用免疫组织化学SABC法观察大鼠肾脏HSP70的表达。
结果:1、术中无大鼠死亡,术后1周内所有大鼠均存活。梗阻性黄疸大鼠胆总管结扎48h后大鼠尿液颜色开始变黄,4~5日时全身皮毛开始黄染,进食量逐渐减少,精神萎靡不振,活动减少。术后1周,梗阻性黄疸大鼠近肝侧胆总管囊状扩张,肝脏弥漫性肿大,呈黄褐色,部分大鼠腹腔内有少量淡黄色渗液,肾脏肿大,质地变硬。
2、常规病理切片观察:胆总管结扎组大鼠肾脏组织表现为肾小管上皮细胞重度空泡变性,灶状肾小管扩张,上皮细胞变扁平,刷状缘脱落。热应激预处理+胆总管结扎组大鼠肾脏组织常规病理切片表现为肾小管上皮细胞中度空泡变性。假手术组大鼠肾脏组织表现为肾小管上皮细胞轻度空泡变性。
3、各组实验检查指标发现,对梗阻性黄疸大鼠进行热应激预处理胆总管结扎后1周,大鼠血胆红素明显升高,血清肌酐随之明显升高,但热应激预处理+胆总管结扎组的血清肌酐升高幅度较小。各组实验结果如下:(1)血清肌酐:胆总管结扎组56.1±0.2ummol/L,假手术组46.1±0.3ummol/L,热应激预处理+胆总管结扎组48.3±0.7ummol/L。(2)血清胆红素:胆总管结扎组62.5±10.4ummol/L,假手术组1.8±0.7ummol/L,热应激预处理+胆总管结扎组47,8±9.6ummol/L。热应激预处理+胆总管结扎组与胆总管结扎组比较有统计学意义(P<0.05),胆总管结扎组与假手术组比较有统计学意义。
4.免疫组化结果表明:HSP70主要在大鼠。肾小管细胞胞浆内表达,在热应激预处理组HSP70的表达明显增多。
结论:本研究通过对梗阻性黄疸大鼠进行热应激预处理发现::热应激顸处理可减轻梗阻性黄疸对大鼠肾脏的损害,推测加强诱导应激状态的HSP70表达可能有助于提高肾对有害刺激的耐受性,减轻肾脏组织的损伤程度。