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桃花粉可育/不育性状是衡量果实产量的一个重要指标,寻找与桃花粉可育/不育基因紧密连锁的分子标记,对开展桃的育种工作具有重要意义。本试验以重阳红×大久保杂交获得的32株F1代群体为试材,利用RAPD、AFLP技术对桃花粉可育/不育性状进行研究。主要研究结果如下: 以改良的CTAB法提取基因组DNA,经过检测,适合于RAPD、AFLP分析的需要。优化了桃适宜的RAPD反应体系:总反应体积为25μl,其中模板DNA40ng,MgCl22.0mM,dNTP 150μM,10×buffer 2.5μl,Taq DNA聚合酶lU,Primer20pmol,余下的用ddH2O补充。 采用BSA法,从F1代个体中随机选取5株样品DNA等量混合,构成花粉可育和不育基因池。利用180个RAPD引物,筛选出了两个与桃花粉育性基因连锁的RAPD标记——OPW03-900、OPW03-1300,经过JoinMap?3.0软件的分析,确定该标记与桃花粉育性基因的遗传连锁距离为6.46cM和15.02cM。 利用96对AFLP引物组合,筛选出16个引物组合在桃花粉育性基因池中表现多态性,通过F1代分离群体验证,结果表明:绝大多数片段与花粉育性基因Ps/ps无连锁关系,只有引物组合E+AT/M+CTT扩增的片段(400bp)与目标性状发生分离。但该标记的重组率较高,为28.1%,与桃花粉育性基因Ps/ps的连锁距离为32.04cM。 把与桃花粉育性基因连锁的RAPD标记OPW03-900转化为SCAR标记SCW03-906,该序列已被Genebank收录,登录号为DQ659676。摸索了与桃花粉育性基因(Ps/ps)连锁SCAR标记的PCR退火温度,最终确定扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性45s,68℃退火45s,72℃延伸1min,35个循环;72℃终延伸5min;4℃终止。通过后代群体及品种验证,表明已成功转化为与桃花粉育性基因连锁的SCAR标记,可以作为桃花粉育性基因的鉴定标记。