【摘 要】
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该实验利用氯化锂(LiCl,GSK3的选择性抑制剂和β-连环素/Tcf信号的激动剂),对GSK3及β-连环素/Tcf信号在培养的猪气管支气管上皮细胞鳞状分化中的作用进行初步探讨.RT-PCR和w
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该实验利用氯化锂(LiCl,GSK3的选择性抑制剂和β-连环素/Tcf信号的激动剂),对GSK3及β-连环素/Tcf信号在培养的猪气管支气管上皮细胞鳞状分化中的作用进行初步探讨.RT-PCR和western blot检测表明,LiCl处理12h后鳞状分化标记物,即小脯氨酸丰富蛋白(SPRP)mRNA和外皮蛋白表达增高;24h时与12h时相比,处理组SPRPmRNA无明显增多,而外皮蛋白表达更高.其次,为分析LiCl处理后β-连环素/Tcf信号的状态,用western blot检测LiCl处理12h和24h后细胞内β-连环素的变化,结果显示LiCl促进β-连环素细胞核内转位,呈时间和浓度依赖的方式.进一步采用脂质体瞬时转染Tcf荧光素酶报告基因质粒,再加10mmol/L LiCl处理,12h后荧光素酶活性无明显变化(与对照质粒相比,P>0.05),而24h后可见荧光素酶活性增高(P<0.05),说明β-连环素/Tcf信号被激活.最后,为分析细胞内β-连环素增高及β-连环素/Tcf信号激活与鳞状分化的关系,瞬时转染稳定突变型β-连环素表达质粒,24h后Western blot检测可见细胞浆和核内β-连环素水平升高;当将突变型β-连环素与Tcf荧光素酶报告基因质粒共转染时,可见Tcf荧光素转录酶活性明显增高(与对照质粒相比,P<0.01),但是RT-PCR检测表明SPRP mRNA表达未见增多(与对照相比,P>0.05).
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