白细胞介素18(IL-18)和白细胞介素15(IL-15)都是与IL—2相似的多功能免疫调节因子，IL-15的重要生物学功能之一是促进记忆性免疫细胞的增殖。因而IL-18和IL-15成为作DNA疫苗免疫增强剂的研究热点，在医学领域的研究报告已较多，而在家禽方面尚少。本文在已有研究的基础上，探讨了选择新的能重组多个基因的真核表达质粒pIRES，构建鸡IL-18基因、鸡IL-15基因新城疫病毒F基因重组真核表达质粒作基因疫苗，试验其对鸡的免疫效果，IL-15基因与IL-18基因在F基因疫苗免疫中的佐剂作用。为此目的，进行了如下试验： ⑴应用常规RT-PCR及基因克隆、重组技术，克隆尚未见报告的广东地区大量饲养的优良肉鸡品种粤黄鸡的IL-15基因，构建其真核表达质粒pcDNA—chIL-15，应用pcDNA—chIL-15肌注试验兔、制备兔抗鸡IL-15多克隆抗体IgG。结果表明：成功克隆粤黄鸡的IL-15基因，测序分析该基因含564bp的阅读框，编码187个氨基酸，与已发表的鸡IL-15基因序列相似性为99()—100％；成功构建IL-15基因重组真核表达质粒pcDNA—chIL-15；用真核表达质粒pcDNA—chIL-15成功制备兔抗鸡IL-15多克隆抗体IgG；以制备的兔抗鸡IL-15多克隆抗体IgG作Western blot检测证明构建的真核表达质粒pcDNA—chIL-15在COS7细胞中有效表达了具有抗原活性的鸡IL-15蛋白。以上试验研究结果为后续研究打下基础。 ⑵选择可重组表达多个基因的真核表达质粒pIRES，利用本组先前克隆构建的NDVF基因和鸡IL-18基因重组的真核表达质粒pcDNA—F、pcDNA—IL-18，和上述构建的pcDNA—chIL-15，再分别构建NDVF基因重组真核表达质粒pIRES—F、F基因与IL-15基因及IL-18基因双表达质粒pIRES—F—IL-15、pIRES—F—IL-18。此外，以先前构建的pcDNA—chIL-18肌注试验兔制备兔抗鸡IL-18多克隆抗体IgG。结果表明：成功构建重组真核表达质粒pIRES—F、重组双表达质粒pIRES—F—IL-15和pIRES—F—IL-18；成功制备兔抗鸡IL-181gG；以制备的兔抗鸡IL-15 IgG、IL-18 IgG和ND阳性血清作Western blot检测证明构建的pIRES—F、pIRES—F—IL-15和pIRES—F—IL-18均已在COS7细胞中成功表达具有抗原活性的NDV F蛋白、鸡IL-15蛋白和鸡IL-18蛋白。以上结果为下一步构建NDV F基因、IL-15基因及IL-18基因联合重组真核表达质粒pIRES—IL-18—F—IL-15奠定了基础。 ⑶利用以上构建的NDV F基因、鸡IL-15基因和鸡IL-18基因重组的各种真核表达质粒，再构建F基因、鸡IL-15基因和IL-18基因联合重组真核表达质粒pIRES—IL-18—F—IL-15，并应用以上制备的兔抗鸡IL-15 IgG、兔抗鸡IL-18 IgG和ND抗血清Western blot试验检测pIRES—IL-18—F—IL-15在COS7细胞中的表达。结果表明：成功构建三基因重组真核表达质粒pIRES—IL-18—F—IL-15，并在COS7细胞中有效表达具有抗原活性的NDVF蛋白、鸡IL-15蛋白和鸡IL-18蛋白。为进行pIRES—IL-18—F—IL-15的免疫试验提供了基础。 ⑷用以上构建的重组真核表达质粒pIRES—F、pIRES—F—IL-18、pIRES—F—IL-15、pIRES—IL-18—F—IL-15进行两次鸡的免疫试验，每次设立传统ND疫苗免疫对照组、pcDNA—chIL-15、生理盐水对照组及空白对照组。每次试验均以T淋巴细胞转化试验(MTT法)、实时荧光定量PCR、间接ELISA、分别检测各组鸡的T淋巴细胞转化、淋巴细胞多种免疫分子基因mRNA的转录及ND抗体水平的动态变化，最后进行NDV标准强毒攻击试验。 ⑸本研究成果包括：①克隆获得了广东地区大量饲养的优良肉鸡品种粤黄鸡的IL-15基因。②成功构建了NDV F基因、鸡IL-15基因和鸡IL-18基因重组真核表达质粒pcDNA—IL15、 pIRES—F、 pIRES—F—IL18、 pIRES—F—IL15、pIRES—IL18—F—IL15。③采用pcDNA—IL15、pcDNA—IL18肌注试验兔的技术制得了兔抗鸡IL-15 IgG、兔抗鸡IL-18 IgG。④以基因重组真核表达质粒pIRES—IL18—F—IL15、pIRES—F—IL18、pIRES—F—IL15和pIRES—F重复进行了鸡的免疫试验，分别获得了55％、45％、40％和30％的免疫保护，试验表明鸡IL-18基因、在鸡IL-15基因与NDV F基因重组的DNA疫苗中主要在细胞免疫方面起促进作用。