H9N2亚型禽流感病毒可引起家禽的呼吸系统疾病,该病毒存在跨宿主传播能力,并可与其它亚型的流感病毒重组形成新的流感病毒(如H7N9等),极大地威胁着人类的健康。炎症反应在机体对抗流感病毒感染中发挥着重要的作用。其中,NLRP3炎性小体及其相关通路基因在机体识别以及清除病毒的内源性免疫进程中,扮演重要角色。NLRP3相关信号通路的激活以及诱导产生的细胞因子及趋化因子有助于机体抑制并清除流感病毒,诱导免疫细胞发挥作用对抗流感病毒的感染。但同时,由此引发的“细胞因子风暴”,又是造成机体病理性损伤及病毒高致死率的主要原因。IFITMs作为干扰素诱导刺激基因之一,以其重要的抗病毒活性被广泛研究。NLRP3炎性小体及其相关通路基因H9N2禽流感病毒感染中发挥怎样的调控机制?IFITMs能否在机体内抑制H9N2禽流感病毒感染?H9N2亚型禽流感病毒PB2蛋白627位点的突变可否影响机体的内源性免疫反应?这些问题都亟待解决。因此,本研究以实验室研究流感病毒常用的BALB/c小鼠为模型,分别从机体内源性免疫的免疫调控机制及抗病毒机制这两个不同方面,研究了野生型H9N2亚型禽流感病毒毒株(VK627)及其PB2蛋白627位点的单一突变株(rVK627E)感染对BALB/c小鼠机体内源性免疫的影响。研究内容如下:1.H9N2亚型禽流感病毒感染及其PB2蛋白627位点对BALB/c小鼠致病性的影响攻毒后分别记录不同组BALB/c小鼠的体重变化情况和死亡率,并取感染小鼠的肺组织制作病理切片进行观察。结果显示H9N2禽流感(VK627)毒株可感染BALB/c小鼠并引发相应的临床症状,包括体重显著下降,严重的间质性肺炎及细支气管上皮细胞脱落和炎性渗出,并最终导致BALB/c小鼠死亡,具有高致死率。而PB2蛋白627位点单一突变可降低该毒株病毒毒力,感染小鼠不致死,相比与对照组,体重轻微下降,肺组织病变显著轻微,且未见明显炎性渗出物及脱落物。2.H9N2流感病毒及其突变株感染对BALB/c小鼠肺NLRP3及其通路相关基因的表达与蛋白组织分布的影响分别采用荧光定量技术和免疫组化技术,检测并比较对照组和攻毒组BALB/c小鼠肺组织内RIP3、NLRP3、IL-1β及TNF-α基因表达及蛋白分布的变化。结果显示,VK627组肺组织RIP3、NLRP3、IL-1β、TNF-α基因与蛋白的表达量均显著高于rVK627E组,说明H9N2亚型禽流感病毒VK627毒株及r VK627E毒株感染可不同程度地激活BALB/c小鼠的NLRP3及其通路相关基因,造成NLRP3相关基因及其下游细胞因子表达量出现差异,这可能是造成BALB/c小鼠肺组织呈现不同程度病理损伤的潜在原因。3.H9N2流感病毒及其突变株感染对BALB/c小鼠肺SLIT2/ROBO4基因表达及蛋白分布的影响分别采用荧光定量技术和免疫组化技术,检测并比较对照组和攻毒组BALB/c小鼠肺组织内SLIT2/ROBO4基因表达及蛋白分布的变化。结果显示,SLIT2/ROBO4基因与蛋白表达在rVK627E毒株感染组上调,而在VK627毒株感组则被持续抑制,可能是VK627毒株感染引起的间质性肺炎及细支气管脱落及炎性渗出的程度强于rVK627E毒株的潜在原因之一,说明SLIT2/ROBO4在BALB/c小鼠机体对H9N2亚型禽流感病毒感染引发的病理损伤进程中,发挥潜在的抗炎功能。但其具体机制仍需进一步验证。4.H9N2流感病毒及其突变株感染对BALB/c小鼠各组织IFITM1/IFITM3表达谱的影响分别采用荧光定量技术和免疫组化技术,检测并比较对照组和攻毒组BALB/c小鼠各组织内IFITM1/IFITM3基因表达及蛋白分布的变化。结果显示,IFITM1/IFITM3基因与蛋白广泛分布于BALB/c小鼠心脏、肝、脾、肺、肾、脑等多个组织器官之中。两株H9N2禽流感病毒感染后,IFITM1/IFITM3基因与蛋白表达谱会发生相应的变化。证实IFITM1/IFITM3基因在BALB/c小鼠机体多组织器官发挥潜在的抗H9N2禽流感病毒感染的功能;同时,H9N2禽流感病毒PB2蛋白627位点的突变会导致机体内源性免疫机制及抗病毒机制发生变化。本研究初步探究了NLRP3炎性小体及其相关通路基因在H9N2流感病毒感染诱导的机体内源性免疫反应中的作用机制,证实H9N2禽流感病毒PB2蛋白627位点的突变会导致机体内源性免疫机制及抗病毒机制发生变化。同时,本研究首次探究了SLIT2/ROBO4在H9N2禽流感病毒感染引发的机体炎症损伤中潜在的抗炎功能,并首次较全面阐释了IFITM1/IFITM3在正常及H9N2禽流感病毒感染的BALB/c小鼠体内的表达谱及其变化情况,为进一步深入研究H9N2禽流感病毒在哺乳动物体内的致病机制及免疫机制,提供了基础数据及理论依据,也为H9N2禽流感病毒的防治提供了新的思路和契机。