玉米秸秆木质素降解菌的筛选鉴定及发酵条件研究

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随着经济的发展,我国能源的需求量也越来越大。由于煤炭、石油等不可再生资源日益短缺,人们逐渐把研究开发的热点转移到利用非粮饲料生产纤维乙醇的可再生能源方面。玉米秸秆是一种丰富可再生的资源,而利用玉米秸秆生产乙醇也必然成为发展趋势。目前,秸秆生产乙醇工艺虽然逐步成熟,但是还存在许多问题,主要表现在预处理效率低、纤维素酶活性低、糖化效率低等方面。因此,本文针对玉米秸秆预处理效率低等问题展开研究,旨在筛选出能够高效降解玉米秸秆木质素的菌株,并对其发酵产酶条件进行优化,提高其对木质素的降解效率高效降解木质素,使秸秆中的纤维素和半纤维素成分最大量的释放出来,从而提高纤维素糖化效率,为工业化生产提供优良菌株资源。本研究从多年玉米秸秆还田的土壤中分离到262株单克隆,利用PDA-愈创木酚平板显色和PDA-苯胺蓝平板褪色的方法,初步筛选到漆酶和过氧化物酶活力较高的5株菌,然后,5株菌进一步酶活测定结果表明:菌株LYADJ-1的产酶能力最强,且同时产生3种木质素酶。根据菌落形态及真菌ITS区基因片段测序分析的结果,菌株LYADJ-1归属于黄孢原毛平革菌(Phanerochaetechrysosporium),并将其命名为Phanerochaete chrysosporium LYADJ-1。随后,本研究对这株菌进行紫外诱变,最终筛选到一株酶活高的突变株LYADJ-1-09,此诱变菌株的发酵结果表明:液态发酵的第9天,酶活力最高,为4600U/L,与野生菌株相比,其酶的活力提高了1.5倍。其次,本研究利用单因素试验和正交试验对诱变菌株LYADJ-1-09液态培养产酶条件进行了优化,得到最优的发酵条件为葡萄糖10g/L,酒石酸铵0.9g/L,吐温-800.1g/L,发酵温度35°C,底物pH值4.5,培养时间6天。在此发酵条件下,Lip活力最高,为6229U/L,与未优化相比,其酶的活力提高了1.35倍。正交试验结果进一步表明:在整个发酵的过程中,葡萄糖含量是影响木质素过氧化物酶酶活最重要的因素,其次是培养温度和初始pH值,而其它因素对酶活的影响较小。最后,本研究利用优化培养条件下获得的粗酶液进行玉米秸秆木质素降解实验。单因素分析和正交试验的结果表明:最优的降解条件为酶液添加量50mL,酶解温度45°C,底物pH值4.3,降解时间60h,在优化的条件下,木质素的降解率可达29.76%。另外,正交实验结果进一步表明:在酶液对木质素的降解过程中,酶液添加量是影响木质素降解率的最重要因素,其次是初始pH值和降解温度。实验数据为进一步工业化研究提供依据。
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