金枪鱼罐头中双酚类化合物荧光偏振检测方法的建立

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内分泌干扰物质(EDCs)是一种外源性干扰内分泌系统的化学物质,进入人体后通过模拟或抑制内源激素功能而改变内分泌原来的功能。罐头内涂层中EDCs的迁移而产生的污染是一个非常严重的食品安全问题。双酚A(BPA)和双酚F(BPF)在工业中主要用作单体,如环氧树脂和聚碳酸酯的生产;用作一些增塑剂中的抗氧化剂;用作软聚氯乙烯(PVC)生产中氯乙烯的聚合抑制剂。BADGE和BFDGE常用作食品罐头保护涂层和PVC有机溶剂树脂中添加剂的起始剂,目的是除去反应过程中释放的盐酸。适度的高亲脂性和不完全聚合都有可能使BPs残留,残留的BPs有可能迁移到环境、食品或食品容器、消费品和人体中。这些化合物广泛用作罐头食品的内部涂层材料,因此食品中双酚类化合物(Bisphenol compounds,BPs)的测定备受关注。本文针对过氧化物酶体产生的增殖物激活受体可识别双酚类化合物的特点,建立了针对金枪鱼罐头中残留的BPs的荧光偏振检测方法。相比抗体而言,受体检测具备可识别一类目标化合物的优势,且制备简单,表现出的检测效果好。受体检测分析技术则是对被测样品中残留的BPs进行检测,这种检测技术对于检测BPs残留具有十分重要的意义。主要研究结论如下:将mPPARα-LBD*的在大肠杆菌菌株Rosetta(DE3)中进行可溶性表达,获取目标蛋白。采用SDS-PAGE、Western blot技术对结果进行表征,发现杂蛋白实现了基本性滤除,得到带有His标签的mPPARα-LBD*。经过浓缩处理后,重组蛋白浓度达0.72mg/mL。通过mPPARα-LBD*与探针工具的饱和结合验证与竞争性结合实验,实验证明重组蛋白与探针、双酚类化合物均有结合能力。将mPPARα-LBD*作为实验环节的识别元件,荧光标记地塞米松(Dex-fl)为荧光探针,通过荧光偏振检测方法进行检测。经过优化处理后的实验反应条件为:探针、蛋白浓度均为8nM,孵育时间设置在40min。在优化条件下,BPA、BPF、BADGE和BFDGE的半数抑制浓度(IC50)分别为12.27、19.13、8.58和13.69μM,检测限分别为1.52、0.24、0.50和1.55μM。对金枪鱼罐头样品进行分析,方法的回收率为78.10%-87.90%,变异系数为9.00%-15.80%。综上所述,荧光偏振免疫分析法具有快速检测金枪鱼罐头中BPs的潜力。
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