论文部分内容阅读
胰岛素样生长因子(Insulin-like Growth Factor, IGF)是人体重要的促生长因子在胚胎的组织器官形成及发育和成体的生长过程中发挥重要的促进作用。胰岛素样生长因子结合蛋白(IGF-binding Protein, IGFBP)是IGF的结合蛋白,目前该家族共有六个成员(分别命名为IGFBP-1-IGFBP-6)。IGFBPs家族通过两条途径发挥作用。一方面,IGF依赖性途径和IGF非依赖性途径。胰岛素样生长因子结合蛋白-6(Insulin-like growth factor binding protein-6, IGFBP-6)是一种分泌型糖蛋白,能够与胰岛素样生长因子-Ⅱ(Insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)特异结合并在血流中运送该因子到各器官、组织,一定程度上抑制着IGF-Ⅱ的生物学活性,其与1GF-Ⅱ结合的能力是与IGF-Ⅰ结合的20-100倍。IGFBP-6分布广泛,在多种组织中都有分布,多种体液和体外建株的细胞系中也检测到了IGFBP-6的存在。目前对IGFBP-6的研究提示,IGFBP-6具有IGF非依赖性的功能,如抑制细胞的生长、促进细胞凋亡等。但目前对IGFBP-6行使其IGF非依赖性功能的机制了解较少。实验室前期研究已发现,重组表达的IGFBP-6蛋白能够进入细胞核。在此基础上,本课题通过GST pull-down实验和免疫共沉淀实验发现IGFBP-6能够与维生素D受体(Vitamin D Receptor, VDR)相互作用。并且IGFBP-6能够结合于VDR的C端结构域。进一步研究发现,IGFBP-6抑制维甲酸X受体(Retinoid X Receptor,RXR)与VDR异二聚体的形成。细胞免疫荧光实验观察,IGFBP-6能够与VDR共定位于细胞核,再次验证了两种蛋白的相互作用。维牛素D3 [1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25(OH)2D3]是VDR的配体,能够结合于VDR并使VDR识别、结合至染色体上的VitD应答元件(VitD Responsible Element, VDRE),从而促进某些在启动子区含有VDRE序列的基因转录,如骨钙素(Osteocalcin, Oste)、生长激素(Growth Hormone,GH)、碱性磷酸酶(Alkaline Phospatase, ALP)等。本课题通过双荧光素酶实验发现,IGFBP-6能够抑制山1,25(OH)2D3引起的骨钙素和生长激素编码序列的高水平转录。另一方面,已知ALP的活性升高是衡量成骨细胞分化的常用指标。ALP活性测定实验发现,由1,25(OH)2D3-VDR介导的ALP活性升高能够被IGFBP-6所抑制。但是,当细胞中的VDR基因被敲除后,IGFBP-6对由1,25(OH)2D3引起的ALP活性升高不起抑制作用。以上结果提示IGFBP-6能够通过与VDR的C端结构域相互作用,抑制VDR的转录功能,从而调节成骨细胞的分化。