背景多囊卵巢综合征(PCOS)是一种以多囊卵巢,高雄激素血症(HA)及持续性无排卵为主要特征的遗传异质性内分泌代谢紊乱疾病。临床上的家族聚集倾向提示遗传因素在其病理生理中发挥了重要作用。国内外对TNF-α基因-308G/A多态与PCOS的相关性进行了研究,而其外显子区域多态与PCOS相关研究未见报导。国内外对雄激素受体基因多态与PCOS的相关性亦进行了研究,主要集中在CAG重复多态,报导结果不一。最近的研究显示AR基因外显子1中rs6152G/A多态与男性秃顶相关,男性秃顶是PCOS家族中男性的表型特征;rs6152G/A多态与PCOS相关研究未见报导。更近的研究揭示PCOS的患者存在外周血促炎因子如TNF-α水平的升高,提示PCOS中慢性炎症作用,其机制尚未完全阐明。本文通过研究TNF-α基因启动子区-308G/A及外显子1中rs3179060C/A及外显子3中rs4645843C/T多态和AR基因外显子1中rs6152G/A及CAG重复多态与PCOS的相关性及其与高雄激素血症之间的关系；TNF-α在多囊卵巢综合征慢性炎症中的作用,以期阐明PCOS的部分分子机制,为进一步有针对性的临床诊断及治疗提供确凿的理论依据,为PCOS的药物治疗开辟新的途径。目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因启动子区域-308G/A,外显1区rs3179060C/A及外显3中rs4645843C/T三个多态与PCOS患者高雄激素血症形成的关系。方法选自2006年6月至2008年2月在中信湘雅生殖与遗传专科医院就诊的汉族PCOS患者130例。诊断标准按照2003年鹿特丹欧洲生殖年会(ASRM/ESHRE)修订的标准,即：1、月经紊乱导致的排卵稀发或无排卵；2、临床或生化的雄激素过多症；3、超声观察到多囊卵巢。且排除其他疾病,如先天性肾上腺增生,分泌雄激素的肿瘤、柯兴氏综合征、甲状腺功能不全,高泌乳素血症,迟发的21羟化酶缺陷等,符合上述3项中的2项者即可确诊为PCOS。本实验入选研究对象的标准为B超显示单侧或双侧卵巢内基础卵泡＞12个与血清睾酮增高或者B超显示单侧或双侧卵巢内基础卵泡＞12个与月经稀发(周期＞37天),同时排除其他内分泌紊乱所造成的高雄激素血症。选择同期在本院生殖中心因输卵管阻塞或男方因素行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的患者175例作为对照组,月经周期正常,无内分泌紊乱,无高血压、心血管疾病、糖尿病家族史。于月经周期2-4天或闭经患者任何时期抽取肘静脉血3ml,取300ul全血,用构椽酸钠(ACD)抗凝,采用全血DNA分离试剂盒,提取基因组DNA。剩余全血分离血清待测激素水平。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态技术(PCR-RFLP)分析TNF-α基因启动子区-308G/A多态；应用聚合酶链反应-高保真酶介导的SNP敏感分子开关技术(PCR-On/off Switch)检测TNF-α基因rs4645843C/T及rs3179060C/A多态,比较各多态位点的基因型频率及各等位基因频率分布,分析各多态与PCOS高雄激素血症之间的关系。结果1.TNF-α基因因启动子-308G/A多态GG, GA, AA三种基因型频率在对照组和PCOS组中分别为83.4%,15.4%,12%和90.8%,8.4%,0.8%；G,A基因频率分别为91.1%,8.9%和95.0%,5.0%。在两组中基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(P=0.196,0.069)。2. TNF-a基因rs3179060C/A多态CC, CA,AA三种基因型频率在PCOS及对照组分别为58.4%,23.1%,18.5%和72.0%,17.7%,10.3%；C,A两种等位基因频率分别为70.0%,30.0%和80.9%,19.1%。基因型频率和等位基因频率在两组中分布均有统计学意义的差异(P=0.035,0.002)。3. TNF-a基因rs4645843C/T多态CC,CT,TT三种基因型频率在PCOS组和对照组分别为34.6%,58.5%,6.9%和43.4%,53.7%,2.9%；C,T两种等位基因频率分别为63.8%,36.2%和70.3%,29.7%。三种基因型和两种等位基因频率分布在两组中的差异无统计学意义(P=0.108,0.093)。4. TNF-a基因-308G/A, rs3179060C/A和rs4645843C/T三个多态各等位基因与PCOS高雄激素血症无明显相关。结论1.中国汉族人群TNF-a基因rs3179060C/A多态与PCOS存在一定的相关性,但与高雄激素血症之间无明显相关,rs3179060C/A多态可能在PCOS的发病中发挥了一定的作用,对高雄激素血症影响不明显。2.中国汉族人群-308G/A多态,rs4645843C/T多态与PCOS及高雄激素血症均无明显相关,可能不是PCOS的主要致病因素。目的探讨雄激素受体基因外显子1(CAG)n重复序列构成的VNTR多态和rs6152G/A多态与中国汉族多囊卵巢综合征(PCOS)患者高雄激素血症形成的关系。方法研究对象PCOS选自2006年6月至2008年10月在中信湘雅生殖与遗传专科医院生殖中心就诊的汉族PCOS患者224例,诊断标准同第一部分；选择同期在本院生殖中心因输卵管阻塞或男方因素行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的患者223例作为对照组,月经周期正常,无内分泌紊乱,无高血压、心血管疾病、糖尿病家族史。应用测序技术检测224名PCOS患者及223名对照妇女AR基因CAG微卫星多态,比较AR基因型及各等位基因频率分布,分析AR基因CAG微卫星多态与PCOS高雄激素血症之间的关系；应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)检测分析rs6152G/A多态,比较rs6152G/A基因型和等位基因频率分布特点及其与PCOS高雄激素血症之间的关系。结果1.AR基因外显子1rs6152G/A多态存在G和A两种等位基因和GG和GA, AA三种基因型。2.G和A两种等位基因频率在PCOS和对照组分别为88.4%,11.6%和92.8%、7.2%,GG和GA+AA两组基因型频率在PCOS组和对照照组分别为82.6%、17.4%和89.2%、10.8%,两组基因频率分布差异有统计意义(P=0.023)；两组基因型频率分布差异也有统计意义(P=0.043)。3.与GG纯合子相比较,携带A等位基因的个体患PCOS的危险性增加1.608倍,95%的可信区间为1.008-2.597(P<0.05)。4.与对照组比较,PCOS患者AR基因(CAG)n重复多态双等位基因平均长度有变短的趋势(22.65±2.5 vs 23.09±2.1), PCOS组短组CAG(n=22)频率明显增高,差异有统计学意义(56.25%vs 29.14%,P<0.001)。5.在PCOS患者中,与高雄激素血症组比较,非高雄激素血症双等位基因的平均长度和长组CAG(n>22)的平均长度明显短(22.3±2.5 vs23.9±2.2, P=0.008;24.3±1.4 vs 25.9±1.6, P=0.005)。6.在PCOS患者中,方差分析显示CAG(n<22), CAG(n=22)和CAG(n>22)三种长度与雄激素水平明显相关(F=3.121,P=0.048)。结论1. rs6152G/A多态基因型和等位基因频率分布与中国汉族PCOS人群明显相关,rs6152A等位基因的携带者是PCOS高危人群。2.中国汉族人群CAG微卫星多态与PCOS和高雄激素血症均明显相关,可能是PCOS及高雄激素血症的主要致病因素。目的探讨TNF-α在多囊卵巢综合征慢性炎症中的作用。方法于2007年6月至2008年10月收集PCOS肥胖和非肥胖患者血样和卵泡液标本各30例,对照组肥胖和非肥胖患者血样和卵泡液标本各30例。分离血清和单核细胞,ELISA分析血清TNF-α水平；提取单核细胞RNA,总蛋白和核蛋白。分离卵泡液和颗粒细胞,提取颗粒细胞的RNA。RT-PCR检测单核细胞TNF-α的mRNA表达水平和颗粒细胞IRS1和IRS2的mRNA表达水平；Western blot检测单核细胞NFκB和IκB的蛋白表达水平并采用凝胶阻滞实验分析NFκB结合活性。结果与对照非肥胖组比较,PCOS肥胖和非肥胖组血清TNF-α水平,单核细胞TNF-α的mRNA的表达,NFκB的蛋白表达,PCOS组NFκB的结合活性明显增高(P<0.05)；而IRS1的mRNA表达下调, IκB蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05); IRS2的mRNA表达水平未明显改变。结论1. PCOS血清TNF-α水平明显提高和单核细胞TNF-αmRNA的高表达,NFκB蛋白高表达,NFκB结合活性明显提高,IκB蛋白的低表达,提示PCOS存在慢性低度炎症反应。2. PCOS颗粒细胞IRS1的表达明显下调,揭示PCOS低度炎症反应可能介导胰岛素抵抗(IR)。