论文部分内容阅读
目的在前期研究的基础上，通过双向电泳条件的优化，对细粒棘球绦虫原头蚴进行蛋白质组学和生物信息学分析，进一步研究原头蚴蛋白质的基础构成和功能情况，寻找具有特异性的靶标蛋白，为包虫病的早期诊断、新药开发、疫苗筛选，提供理论依据。方法1.取宁夏医科大学总医院肝胆外科包虫病人术后的包囊，经无菌分离细粒棘球绦虫原头蚴。2.对原头蚴蛋白质样品并进行双向电泳分离，并对双向电泳条件进行优化。3.选择分离的蛋白点进行MALDI-TOF/MS检测得到肽指纹图谱PMF。4.将PMF数据提交到互联网中蛋白信息研究数据库中，与已有的蛋白信息进行匹配分析，初步鉴定出样本中蛋白质，通过COGs（Clustersof Orthologous Groups of proteins）蛋白质直系同源簇数据库、 GO （GeneOntology）蛋白质功能分类数据库、 KEGG pathway蛋白质代谢通路数据库，分析这些蛋白的功能与性质。5.利用免疫印迹的方法，用包虫病人的血清识别原头蚴抗原，并进行质谱鉴定及生物信息学分析。结果1.通过原头蚴蛋白质样品的双向电泳分析，获得了330个蛋白点。2.从双向电泳凝胶上切下来的蛋白点通过MALDI-TOF MS质谱检测，原头蚴样品中有157个蛋白点获得了肽指纹图谱（PMF）数据。3.初步鉴定了细粒棘球蚴原头蚴中的部分蛋白点，共有49个蛋白点。4.对鉴定得到的蛋白点，我们进行了生物信息学的初步分析，发现这些蛋白主要与细胞组成、新陈代谢、信号转导以及物质运输有关。5.对原头蚴蛋白利用包虫病人的血清对对原头蚴蛋白进行western blot的识别，成功识别了80个蛋白点，并对这些蛋白点进行质谱鉴定，最后有28个蛋白点得到鉴定。结论通过双向电泳条件的优化，成功建立了细粒棘球绦虫原头蚴蛋白质双向电泳图谱；利用蛋白质组学和生物信息学技术，进一步研究原头蚴蛋白质的构成和功能情况，成功建立了细粒棘球绦虫原头蚴蛋白质组基础数据库