【摘 要】
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目的 使用荧光定量PCR扩增法对92例ICU患者气道抽吸物病原学阳性的肺泡灌洗液标本进行检测,确定其白细胞内吞噬细菌的种类。结合临床表现、实验室检查及影像学检查等,统计分析PCR与痰培养结果的相关性,探讨肺泡灌洗液中白细胞吞噬细菌种类的PCR检测法准确性,对ICU内HAP/VAP鉴别致病菌和定植菌起到辅助诊断的价值。方法 病例来源为2019年3月至2019年8月本院重症医学科（ICU）内住院病人。
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目的 使用荧光定量PCR扩增法对92例ICU患者气道抽吸物病原学阳性的肺泡灌洗液标本进行检测,确定其白细胞内吞噬细菌的种类。结合临床表现、实验室检查及影像学检查等,统计分析PCR与痰培养结果的相关性,探讨肺泡灌洗液中白细胞吞噬细菌种类的PCR检测法准确性,对ICU内HAP/VAP鉴别致病菌和定植菌起到辅助诊断的价值。方法 病例来源为2019年3月至2019年8月本院重症医学科（ICU）内住院病人。经过筛选选取了 92例存在人工气道的患者,所有患者均在同一时间经纤维支气管镜留取痰液与肺泡灌洗液,首先完成痰培养检查,留存肺泡灌洗液（-20℃）,并签署知情同意书。纳入标准:ICU内住院时间＞48小时的18岁以上患者;排除标准:存在肺部以外感染;目标性抗感染治疗无效的患者;.中枢性高热患者;不能耐受纤维支气管镜患者。研究分组:结合临床肺部感染评分（CPIS）评分,将纳入研究的患者分为2组,CPIS＞6 分,CPIS≤6 分。临床数据采集:患者一般资料、病史体征、临床诊断、血常规、C反应蛋白、降钙素原等实验室检查,影像学检查,同时记录患者目标性抗感染治疗后5天的体征变化、实验室检查及影像学特征改变。荧光定量PCR检测方法:通过CD45抗原及磁珠分离法获取肺泡灌洗液中的白细胞,提取胞内DNA,进行荧光定量PCR扩增（Kpn-DNA）,检测灌洗液中的白细胞内的鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌。统计学处理:1.所有数据均用SPSS20.0统计软件分析,正态性资料以均数±标准差（x±s）表示,偏态资料或两端有极端值的计量资料以四分位数间距（M（P25-P75））表示,计数资料以频数和百分比表示;2.计量资料符合正态分布满足方差齐性,两组间采用独立样本t检验,不符合正态分布用非参数（秩和）检验,计数资料采用卡方检验,不满足卡方检验条件的采用Fisher确切概率法,配对设计的计数资料采用McNemar检验,并计算Kappa值。3.根据PCR检测结果绘制ROC曲线,并计算曲线下面积。α取0.05,即P＜0.05差异有统计学意义。结果1.两组患者的年龄、性别等一般资料无统计学差异（P＞0.05）,但患者体温,白细胞计数、降钙素原等炎症指标具有统计学差异（P＜0.05）。2.CPIS＞6分组,经McNemar检验分析得到PCR检测结果与痰培养结果无显著性差异。K值一致性检验,kapp值为0.846,两种方法吻合度较强,两种方法一致性有统计学意义（p=0.000）。ROC曲线下面积为0.924（0.849-0.999）,灵敏度为91.18%,特异度为93.55%,正确指数为84.72%。荧光PCR检测结果阳性考虑存在HAP/VAP。3.CPIS≤6分组McNemar检验分析得到PCR与痰培养检测结果有显著性差异,即两种方法检测效果不同。kapp值为0.065,两种方法吻合度较弱,两种方法一致性无统计学意义（p=0.557）。痰培养阳性,PCR检测结果阴性的考虑存在气道定植。结论1.荧光定量PCR扩增法能够早期、快速识别ICU内的HAP/VAP,同时对致病菌、定植菌的确定起到辅助作用。2.荧光定量PCR扩增法检测结果阳性,考虑该细菌为致病菌;PCR检测结果阴性,考虑该细菌为定植菌,但仍需与临床体征、炎症指标、影像学检查等相结合判断。3.PCR可实时检测,能有效缩短治疗等待时间,减少抗生素滥用导致细菌耐药的发生,为早期目标性抗感染治疗提供依据,可考虑在临床推。
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