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第一部分TLR9在胰腺癌中的表达及临床意义目的：检测TLR9在胰腺癌组织中的表达,探讨其临床意义。方法：采用实时定量PCR法、免疫印迹及免疫组织化学方法检测30例胰腺癌组织及癌旁组织、10例正常胰腺组织中TLR9的表达,并分析胰腺癌组织中TLR9的表达与病理分级、临床分期及转移的关系。结果：胰腺癌TLR9mRNA扩增倍数值2.47(1.87～3.07),癌旁组织为1.29(1.14～1.44),两组表达有显著差异(t=10.49,P<0.01)。胰腺癌TLR9蛋白阳性表达率为73.3%,癌旁组织为33.3%,正常胰腺组织为20%,呈递减趋势(χ2=13.99,P<0.01)。胰腺癌TLR9高表达和肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移呈正相关。Western blot结果与免疫组织化学一致,灰度分析结果显示差异具有显著性,具有统计学意义(P<0.01)。结论：TLR9在胰腺癌组织中高表达,且TLR9表达与肿瘤分级有关,提示其可能参与了胰腺癌的发生、发展过程。第二部分CPG ODNs对人胰腺癌细胞株Panc-1生物学行为的影响目的：研究CPG ODN2216对Panc-1细胞生物学行为的影响,并探讨其临床意义。方法：通过免疫荧光化学方法检测TLR9在Panc-1细胞中的表达。采用细胞粘附、划痕实验、侵袭实验、细胞克隆及MTT增殖实验,研究CPG ODN2216对细胞粘附力、活动力及增殖力等生物学的影响。结果：免疫荧光化学方法证明TLR9在Panc-1细胞中的高表达,并主要在胞浆中表达。划痕实验、体外粘附实验、基质胶侵袭实验、细胞克隆实验证明CPG ODN2216实验组细胞粘附力及活动力明显低于对照组,并具有显著性统计学意义(P<0.01)。MTT法检测序列组增殖力明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),且增值活性具有时间剂量依赖性。结论：TLR9在胰腺癌细胞呈高表达,且TLR9基因与人类胰腺癌的侵袭转移潜能相关,外源配体CPG ODN2216的使用可明显抑制人类胰腺癌细胞Panc-1的侵袭、迁移能力。第三部分建立胰腺癌的种植瘤模型及CPG ODN2216对胰腺癌裸鼠移植瘤生长影响目的：在第二阶段的研究结果基础上,通过建立人胰腺癌Panc-1的动物模型,进一步探讨CPG ODNs对人胰腺癌裸鼠皮下种植瘤生长的抑制作用。方法：裸鼠生长两周后按随机原则分为三组,空白对照组、生理盐水组和CPG ODN2216组。按分组情况治疗四周后处死裸鼠,比较三组移植瘤的体积及质量的不同,并通过免疫组织化学方法检测TLR9蛋白在各组种植瘤中的表达水平。结果：各组裸鼠皮下接种肿瘤细胞6周后均成功致瘤,成瘤率100%。处死裸鼠后比较三组肿瘤,CPG ODN2216组肿瘤体积及质量分别为(0.29+0.07)cm3、(0.81±0.17)g,明显小于生理盐水组(0.69±0.09) cm3、(1.74±0.22) g及空白对照组(0.67±0.10)cm3、(1.72±0.25)g,具有统计学意义(P<0.01)。免疫组化结果证实TLR9蛋白在CPG ODN2216组种植瘤中的表达明显低于另外两组。结论：TLR9基因在胰腺癌发生中占重要地位,CPG ODN2216具有明显的抑制人胰腺癌裸鼠皮下种植瘤的生长作用。