土壤生防放线菌的分离、筛选与鉴定

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为开发利用生防放线菌控制植物枯、黄萎病,本研究以含50μg/mL K2Cr2O7的高氏合成一号为分离培养基,采用土壤稀释法分离生防放线菌;以大丽轮枝孢、尖镰孢萎蔫专化型和尖镰孢西瓜专化型为靶标菌,通过皿内试验及盆栽试验筛选具有较高抑菌活性的放线菌株;通过抑菌能力,耐药性和定殖能力等的测定进一步研究了入选放线菌的生物学活性;最后对筛选出的优势放线菌株进行形态特征、培养特征及生理生化特性分析,得到初步鉴定结果。主要研究结果如下:从采自江苏及广西4个农化厂周边的6份土样中共分离获得50株放线菌。通过平板对峙法初筛获得6株具有较高抑菌活性的放线菌株,分别为菌株JSGF4、JSGF10、GXDM6、JSCK14、JSJF7和JSJF5,占分离所获总放线菌株数的12%。整体看,从江苏省农化厂周边土样中分离获得的拮抗菌株数较多。测定6株拮抗放线菌的发酵滤液对靶标菌的菌丝生长和孢子萌发抑制作用,结果表明,菌株JSGF4、JSGF10和JSCK14的发酵滤液对3种靶标菌有较强抑制作用,菌丝生长抑制率及孢子萌发抑制率均在60%以上,其中菌株JSGF4发酵滤液能够强烈抑制大丽轮枝孢菌丝生长,抑制率高达100%。盆栽试验表明,6株拮抗放线菌对茄子黄萎病有良好防治效果,菌株JSGF10对茄子黄萎病的防效高达74.55%,在植物黄萎病生防方面具有进一步开发价值。拮抗放线菌定殖能力测定结果表明,6株拮抗放线菌均不能在茄子植株体内定殖,但能够在茄子根际土壤中存活,菌株GXDM6的根际定殖能力最强,在茄子根际土壤中的孢子浓度达3×106cfu/g。抑菌能力测定结果显示,6株拮抗放线菌对不同病原真菌均有一定抑制作用,显示出较广的抑菌活性,特别是对子囊菌门及半知菌类的抑菌活性突出。耐药性结果显示6株拮抗放线菌对50%多菌灵、40%五氯硝基苯和25%氰烯菌酯均有较强的耐受性,在药剂浓度高达500μg/mL下仍能生长良好,但对75%百菌清敏感,各菌株在1μg/mL的药剂浓度下不生长。以菌株JSGF10作为供试菌,称量菌株在小米、SNB和高氏合成一号三种培养液中培养后的菌体干重,并测定各发酵滤液的抑菌活性,以选择最佳培养液种类。结果表明经高氏合成一号发酵培养的菌体量最多,发酵滤液抑菌活性也最强。对筛选出的4株放线菌:菌株JSGF4、JSGF10、JSCK14和GXDM6进行形态特征、培养特征及生理生化特性分析,初步鉴定菌株JSGF4为龟裂链霉菌(Streptomycesrimosus),菌株JSGF10和JSCK14为白色链霉菌(Streptomyces albus),菌株GXDM6为灰色链霉菌(Streptomyces griseus)。本研究结果表明,从特殊生境中能够获得拮抗活性、耐药性和土壤定殖能力强的生防放线菌。筛选出的菌株JSGF4和JSGF10对大丽轮枝孢有明显抑制作用,这为生防放线菌在植物黄萎病防治方面的应用提供了理论依据。
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