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辅助孵化(Assisted Hatching, AH)是一种能够帮助胚胎从透明带中孵出的技术。体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET)过程中的着床率低下现象,一直是困扰人们的问题。临床上,运用AH技术能够有效提高囊胚孵化率以及胚胎着床率。目前,人工辅助孵化的方法主要有机械法、化学法、酶消化法、激光法以及压电脉冲(piezo)显微操作法。AH的具体操作方法包括对卵母细胞的透明带进行打孔或削薄等方法,进行辅助孵化处理时所选择的胚胎发育时期也各不相同。然而,究竟哪种AH方法最有效,选择哪一发育时期的胚胎进行AH操作能够得到最理想的效果,还没有具体研究。本实验利用piezo显微操作法,针对小鼠成熟卵母细胞及着床前各时期胚胎进行不同方式的AH处理,统计各种方法处理后胚胎的发育率和囊胚的孵化率,以探明最佳的AH处理方式。本研究采用的AH方法分别为：(1)透明带打小孔(small hole, SH),开孔长度约为10μm；(2)透明带打大孔(large hole, LH),开孔长度约为50μm；(3)透明带削薄小区域(small length thinner, ST),削薄区域直径约为50μm；(4)透明带削薄大区域(large length thinner, LT),削薄区域直径约为120μm。选择不同发育时期的卵母细胞或胚胎分别进行AH处理,各时期分别为：(1)MⅡ期卵母细胞；(2)IVF体外培养得到的2-cell胚胎；(3)IVF体外培养得到的4-cell胚胎；(4)IVF体外培养得到的桑椹期胚胎。我们的研究结果表明：不同AH方法中,SH处理后囊胚孵化率较高,且多数胚胎为不完全孵出；LT处理后胚胎完全孵化率较高。我们的结果还表明在桑椹胚期进行AH处理效果最好。本实验的结论为：利用piezo对小鼠着床前胚胎进行辅助孵化处理,在桑椹胚期进行SH处理可以获得最高的囊胚孵化率。该研究将为临床上人类胚胎的辅助孵化技术提供基本依据。