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男性不育是由环境因素和遗传因素综合所致的复杂疾病，排除临床上常规检查能获知的病因外，仍有约40％的患者不育原因尚不清楚。由于无法对“症”下药，该部分患者临床治疗效果并不理想，因此辅助生殖技术成为其得到后代的首选。但是，辅助生殖技术并不能揭示发病原因，而且还存在致病基因垂直传播的可能。因此只有从包括营养因素在内的环境和遗传双重角度揭示发病机理，寻找致病/易感基因，才是治疗和预防男性不育的根本所在。叶酸作为一种营养因素，可有效预防新生儿神经管闭合缺陷的发生，在很多国家已经成为育龄女性的必补品。但是关于叶酸在男性生殖中的报道却十分有限。动物实验表明，用叶酸缺乏的饮食饲养大鼠或小鼠，可导致其精子密度和活力下降；叶酸代谢过程中的限速酶—亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)在小鼠睾丸中的活性是其他组织的5倍，MTHFR基因敲除小鼠表现为严重的生精障碍和雄性不育。目前，在人类精浆和前列腺中己发现有高亲和力的叶酸结合蛋白，精浆中叶酸的浓度是血浆中的1．5倍，而且适当补充叶酸可明显改善精液质量。这一系列实验提示：叶酸和叶酸代谢循环在男性生殖中发挥重要作用。鉴于此，我们检测了500份精浆(包括精子密度正常的个体285例和少精症患者215例)中叶酸的含量，并分析了叶酸代谢相关基因MTHFR，MS(蛋氨酸合成酶编码基因)和TYMS(胸腺嘧啶核苷酸合成酶编码基因)在正常已育人群和男性不育患者中的多态性分布。本研究分为两个部分：
第一部分：经过严格筛选，我们收集并筛选到少精症患者精浆215份，精子密度正常个体精浆285份。采用微生物法检测了精浆总叶酸和非甲基四氢叶酸的浓度，发现总叶酸在严重少精症患者和精子密度正常个体中存在统计学差异(p=0．047)，但是非甲基四氢叶酸浓度在患者组与对照组中没有差异。同时，我们分析了对照组与患者组精浆锌浓度，发现无精症患者锌浓度高于对照组，两者具有显著性差异(p=0．004)。分析血浆HCY发现，HCY在患者组与对照组中没有差异。
第二部分：经过严格筛选，我们排除了临床病因已知的患者血样，共收集临床原因不明男性不育患者血样491例和正常已育男性血样430例。应用聚合酶链式反应—限制性酶切片段长度多态性(PCR—RFLP)的方法研究了MTHFR基因C677T位点和A1298C位点，MS基因A2756G位点以及TYMS3’UTR端缺失/插入位点的多态性分布，结果发现：对于C677T位点来说，等位基因T在患者组中的分布频率为65．47％，在对照组中为55％，两者具有显著差异(p<0．001)。基因型分析表明，纯合突变基因型TT、杂合基因型CT以及整合后的基因型CT+TT在患者组和正常对照组表现出极显著差异(均为p<0．001)，提示MTHFR基因C677T位点可能作为男性不育的风险位点。对于A1298C来说，等位基因C的分布频率在患者组和对照组中具有极显著差异(p<0．001)；基因型分析表明，纯合突变基因型CC、杂合突变基因型AC以及整合后的基因型在患者组和对照组同样具有极显著性差异(均为p<0．001)，提示MTHFR基因A1298C位点可能是男性不育的风险位点。因为MTHFR基因C677T位点和A1298C位点均与男性不育表现出相关性，所以我们对这两个位点进行了联合分析，分析结果显示，两个位点具有联合作用，随着等位基因突变个数增多，患病的风险就会增大(P<0．001)。分析MTHFR基因C677T位点和A1298C位点构成的单倍型时发现，677T/1298A和677C/1298A分别为患者和正常组的常见单倍型。单倍型677T/1298C和677C/1298C在患者组与正常对照组间有极显著性差异(p<0．001和p<0．05)，可能为男性不育的风险单倍型。对于TYMS3’UTR端缺失/插入位点和MS基因A2756G位点来说，两个位点无论是等位基因的频率还是基因型的频率，在正常组与患者组间的比较都没有统计学差异。这说明TYMS3’缺失/插入位点和MS基因A2756G位点多态性与男性不育间没有相关性。