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环境雌激素双酚A（Bisphenol A，BPA）是一种重要的化工原料，其广泛的应用范围导致了无处不在的暴露。BPA具有弱雌激素样作用和强抗雄激素样作用，可对雄性生殖系统产生影响。然而关于BPA雄性生殖毒性的人群研究和相关机制研究的报道极为有限。本研究通过人群研究探讨BPA对男性的生殖毒性，通过动物实验研究进一步探索可能的机制，为明确BPA的雄性生殖毒性及其机理提供科学依据。目的采用人群研究和动物实验研究相结合的方法，探讨BPA暴露对男性生殖功能的影响，并进一步探索可能的机制，为BPA对生殖功能的作用及其机制的研究提供新的思路。1．通过分析BPA对男性精子质量、血清性激素水平以及性功能之间的关系，探讨BPA对男性的生殖毒性；2．探讨BPA对雄性大鼠生殖系统及精子质量的影响，以及对主要激素睾酮（T）与卵泡刺激素（FSH）的影响；3．通过研究BPA对激素受体AR、FSHR和信号通路相关基因Src、ERK1/2、CREB的影响，初步探讨BPA在精子发生过程中可能的分子机制。方法人群研究：收集543名研究对象，采用结构式问卷调查研究对象一般人口学特征、既往病史及用药史、生活方式、性生活史、BPA暴露史等。采集研究对象尿液、精液、血液，应用高效液相色谱法(HPLC)检测尿液中BPA水平；计算机辅助精子分析系统检测精子数量、活动力和存活率，改良巴氏染色法检测精子形态学；放射免疫法(RIA)检测血清卵泡刺激素（FSH）、泌乳素（PRL）、睾酮（T）、雌二醇（E2）水平，酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清抑制素B (INB)、游离睾酮（FT）、性激素结合球蛋白（SHBG）和雄烯二酮（AD）水平。应用SPSS16.0软件建立数据库并运用t检验、χ~2检验、趋势χ~2检验、pearson相关分析、spearman秩相关分析、多元线性回归分析等检验方法进行统计分析。动物实验：雄性Wistar大鼠（200±20g）28只按体重随机分为4组，每天固定时间灌胃染毒，染毒剂量分别为BPA0、50、100、200mg/（kg.d），连续4周后处死大鼠，采集生殖系统脏器、血清及一侧附睾尾精子。计算机辅助分析检测大鼠精子密度、活力、存活率，改良巴氏染色法检测精子畸形率；放射免疫法检测血清T、FSH水平。采用Real-time PCR和Western-blot法分别检测大鼠睾丸中AR、FSHR、Src、ERK1/2、CREB基因mRNA和蛋白表达水平。采用SPSS16.0建立数据库并运用单因素方差分析、Dunnet-t检验进行统计分析。结果人群研究1．尿液中BPA浓度升高与精子密度低下、精子总数低下、精子活动力低下、精子存活率低下之间存在剂量效应关系；在调整可疑混杂因素后，尿液中BPA浓度与精子密度、总数、活动力、存活率之间存在负相关关系。2．尿液BPA浓度升高与FT, AD, SHBG, PRL, FSH水平异常之间存在剂量效应关系。在调整可疑混杂因素后，尿液BPA浓度与AD、FSH水平之间存在负相关关系，与SHBG、PRL、E2水平之间存在正相关关系。3．尿液中BPA浓度升高与男性性欲冲动程度、受刺激勃起能力、完成性交能力、射精强度、性生活满意度降低，以及勃起困难程度和射精困难程度升高之间存在剂量效应关系；在调整可疑混杂因素后，尿液中BPA浓度与各表现指标之间存在相关关系。动物实验1．各染毒组体重增长量和染毒后体重之间存在差异，高剂量组体重增长量显著低于对照组；各染毒组大鼠精囊、前列腺、睾丸、附睾等性腺器官的脏器系数存在显著性差异，与对照组相比，中、高剂量组睾丸、精囊腺、前列腺脏器系数明显降低，高剂量组附睾脏器系数也明显降低。2．各染毒组间精子质量存在显著性差异；与对照组相比，中、高剂量组精子活力和存活率显著降低；高剂量组精子密度也显著降低。3．各染毒组间性激素T和FSH水平存在显著性差异；与对照组相比BPA中、高剂量组血清T水平明显降低，而高剂量组FSH水平明显升高；各染毒组间AR、FSHR mRNA和蛋白表达平均存在显著性差异；BPA中、高剂量组大鼠睾丸组织中AR、FSHR mRNA和蛋白水平均显著低于对照组。4．未发现各染毒组间Src mRNA和蛋白以及蛋白磷酸化表达之间存在显著性差异；未发现各染毒组间ERK1/2mRNA和蛋白表达之间存在显著性差异,但ERK1/2蛋白磷酸化表达存在显著性差异，BPA中、高剂量组ERK1/2蛋白磷酸化水平显著低于对照组；未发现各染毒组间CREB mRNA和蛋白表达之间存在显著性差异,但CREB蛋白磷酸化表达存在显著性差异，BPA高剂量组CREB蛋白磷酸化水平显著低于对照组。结论1．尿液BPA水平升高与男性精子质量下降、性激素水平异常、性功能下降相关；2．高剂量BPA染毒对雄性Wistar大鼠有明显的生殖毒性，导致性腺器官受损，精子质量下降、激素水平改变；3．BPA可导致大鼠睾丸组织中ERK1/2、CREB蛋白磷酸化水平降低，提示BPA可能通过对ERK1/2、CREB通路的抑制而影响生殖功能，但未发现Src与这一通路的上游调控有关。