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【目的】制备抗人整合素β3亚基的单克隆抗体，研究其对肿瘤治疗的作用。并在此单抗的基础上，为降低鼠源性单抗的异种抗原性和高分子量，应用基因工程抗体技术制备抗人整合素β3亚基单链抗体(ScFv)，为进一步研究整合素β3抗体在肿瘤诊断和治疗中的作用奠定基础。
【方法】从人白细胞中提取总RNA，用人B3胞膜外基因的引物，以RT—PCR的方法扩增人B3胞膜外基因，将其克隆至原核表达载体pQE30中，获得含B3胞膜外基因的高效表达载体pQE30-β3，将其转化大肠杆菌M15，用IPTG诱导表达，对表达产物进行纯化，获得B3蛋白。将此蛋白免疫BALB/c小鼠，应用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人整合素β3亚基的单克隆抗体(mAb),通过小鼠体内抑制黑色素瘤生长实验和体外抑制HUVEC细胞增殖及促进HUVEC细胞凋亡的实验筛选出具有抑制肿瘤生长作用的单抗。并从分泌此单抗的杂交瘤细胞中提取总RNA，用小鼠抗体可变区基因的通用引物，以RT—PCR的方法扩增出抗B3抗体的重链可变区(vH)和轻链可变区(VL)基因，再通过PCR的方法在VH和VL基因间插入柔性连接子(G1y4Ser)3，构建出抗β3抗体的ScFv基因。将其克隆至原核表达载体pQE30中，获得抗β3单链抗体基因的高效表达载体pQE30-β3-ScFv，转化大肠杆菌M15，用IPTG诱导表达，对表达产物进行纯化和凝胶柱上在位复性，用EUSA的方法鉴定其结合β3抗原活性。
【结果】扩增获得了β3胞膜外基因，构建了β3蛋白的原核表达载体，表达纯化了β3蛋白，成功制备了8株抗人整合素β3亚基的单克隆抗体。经过体内和体外实验筛选出一株具有显著抑制肿瘤生长的单抗4F12。通过基因工程抗体技术获得4F12抗体的VH和VL基因，并构建出抗β3抗体的ScFv基因，在大肠杆菌中获得了表达，表达蛋白相对分子质量约为26×103，主要以包涵体形式存在。经金属螯合亲和层析柱(Ni-NTAagarose)纯化和凝胶柱上在位复性后，EUSA结果证实其具有良好的结合β3抗原活性。
【结论】成功地获得了人整合素β3蛋白，并制备了抗人整合素β3亚基的单克隆抗体，证实了此抗体具有抑制肿瘤生长的作用。构建和表达了其ScFv基因，获得了具有结合β3抗原的ScFv。为进一步研究整合素β3抗体在肿瘤诊断和治疗中的作用奠定基础。