论文部分内容阅读
目的脓毒症的发病率和病死率逐年上升,是威胁人类健康的重大疾病,是危重病急救医学领域的多发病和常见病,但在临床治疗上仍未取得突破性进展。脓毒症是炎症的不适当过度或不足的免疫反应的结果,TLRs介导了多种致病微生物的信号跨膜传递。革兰氏阳性细菌胞壁成分LTA特异性由TLR2识别,而TLR2介导的炎症反应中sTLR2被认为是重要的一线调控因子。但对于TLRs信号途径,其适当的免疫反应效应是促炎和抗炎的平衡,脓毒症时sTLR2/TLR2所存在的平衡状态及其负性调节作用有待证实。本项目立足于脓毒症,以人单核细胞系U937细胞作为研究对象,通过对sTLR2/TLR2分布平衡在TLRs信号途径负性调节中作用机制的研究,明确该信号途径免疫反应激活和抑制的平衡机制,以此为基础寻求干预措施,控制在感染时不适当的炎症反应,阻止脓毒症的发生发展,为治疗威胁人类健康的重大疾病提供新的策略。方法本实验采用体外培养人单核细胞系U937细胞,分为空白对照组、低剂量LTA组、中剂量LTA组、高剂量LTA,对照组以空白培养液培养,各剂量LTA组培养液中加入不同浓度的LTA,培养至相应时点后收集上清液及细胞,检测上清液中sTLR2、IL-10及IL-8蛋白水平、核内TLR2的mRNA水平、免疫荧光法检测NF-κB活性。结果1.免疫荧光染色图像观察:经LTA刺激后,30ug/ml LTA组较10ug/ml LTA组细胞核内NF-κB p65的荧光强度明显升高,二者均高于正常对照组细胞核内p65的量;两两比较存在显著性差异(P<0.01)。2.随来自金黄色葡萄球菌的脂磷壁酸(LTA)刺激剂量变化,细胞因子sTLR2、IL-10、IL-8分泌,TLR2mRNA表达存在变化。低剂量组、中剂量组sTLR2水平随时间变化升高,炎症反应有所控制;高剂量组sTLR2水平随时间变化下降,IL-8、TLR2mRNA升高明显,炎症反应突出。结论革兰氏阳性细菌胞壁成分LTA特异性由TLR2识别,启动NF-κB途径,诱导机体产生多种炎症介质的瀑布反应。免疫荧光检测NF-kb转移实验中10ug/mlLTA组的细胞核内荧光强度值低于30ug/ml LTA组。与40ug/ml LTA组相比,3ug/ml LTA组、10ug/ml LTA组的炎症反应水平适当,上清液ELISA测定的STLR2的分泌水平逐渐升高,IL-10的分泌变化不明显,正是由于可溶性TLR2(sTLR2)的存在,才会使得促炎因子的释放存在一定的削弱,说明sTLR2在炎症反应的平衡调控方面起到了非常重要的作用。检测细胞核内TLR2mRNA的实验中发现TLR2mRNA水平大致与上清液中sTLR2水平变化呈相反的趋势。考虑这可能是因为sTLR2的产生并不是微生物抗原激活TLR2的结果,而是对TLR2的细胞内加工产生的,这一过程不需要额外的蛋白质合成。正是由于sTLR2的特殊的合成机制使得sTLR2与TLR2表达出现此消彼长的变化,从而影响到NF-κB信号转导通路及炎性细胞因子的分泌过程。我们应根据sTLR2的负性调节机制,以此为基础寻求干预措施,控制在感染时不适当的炎症反应,阻止脓毒症的发生发展,为治疗威胁人类健康的重大疾病提供新的策略。