目的 建立经济、简便的同时分离培养肝星状细胞及枯否细胞的方法,为进一步深入研究肝纤维化的发生机制及抗肝纤维化药物的疗效评价做准备。 方法 应用胶原酶和蛋白酶对大鼠肝脏进行原位灌流、消化,获得大鼠肝脏非实质细胞,经18%(W/V)的Nycodenz密度梯度离心,一步分离肝星状细胞及枯否细胞。肝星状细胞处在界面,而枯否细胞处在界面下。台盼蓝染色鉴定细胞活力。Desmin免疫细胞化学染色鉴定肝星状细胞。溶菌酶免疫细胞化学染色鉴定枯否氏细胞。 结果 该方法分离的肝星状细胞和枯否氏细胞的纯度达95%左右。肝星状细胞得率3.0±0.5×10~7/肝,枯否氏细胞得率4.0±0.5×10~6/肝。 结论 应用Nycodenz一步密度梯度离心法可以很好的同时分离肝星状细胞和枯否氏细胞。