论文部分内容阅读
研究目的：(1)、通过该实验来评估以MTDH/AEG-1为靶点的基因疫苗对小鼠免疫功能的影响。(2)、通过体内外实验探讨以MTDH/AEG-1为靶点的基因疫苗对小鼠前列腺癌的生长转移及增强化疗药物紫杉醇敏感性的作用。研究方法：通过流式细胞仪检测免疫后小鼠脾脏CD4~+和CD8~+T细胞亚群及采用CytoTox96Non-Radioactive Cytotoxicity Assay试剂盒检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应。免疫预防模型：将C57BL/6雄性小黑鼠（6-8weeks old）随机分为三个实验组（n=8），分别给予PBS、包含Pub-MTDH、Pub的减毒沙门氏菌（10~8cfu）灌胃饲服免疫；每周免疫一次，共免疫三次。最后一次免疫后一周，均在三组小鼠前列腺原位（左、右背侧叶）接种10~5RM-1细胞来构建前列腺原位移植瘤模型，诱导自发盆腔、腹膜后淋巴结转移；记录各组小鼠肿瘤大小及盆腔、腹膜后淋巴结转移数（以HE染色为准），通过免疫组织化学方法检测原位肿瘤中CD8~+分子的表达情况、用Tunel试剂盒检测肿瘤细胞凋亡情况。治疗模型：将C57BL/6雄性小黑鼠（6-8weeks old）随机分为四个实验组:Taxol、Pub、Pub-MTDH、Pub-MTDH+Taxol（n=12），分别在各组小鼠腹部皮下接种10~5RM-1细胞，建立皮下移植瘤模型，之后各组小鼠分别在3、7、11天分别给予PBS、Pub、Pub-MTDH、Pub-MTDH的DNA疫苗灌胃饲服免疫三次，Taxol、Pub-MTDH+Taxol组小鼠分别在4、8、12天给予紫杉醇（20mg/kg）用生理盐水稀释后行腹腔注射；观察皮下肿瘤生长情况，绘制肿瘤生长曲线图、小鼠荷瘤生存曲线图，27天时取下肿瘤比较大小及重量；通过Tunel法检测肿瘤细胞凋亡情况、RT-PCR检测皮下肿瘤组织中Bcl-2、Bax基因表达情况。结果：MTDH/AEG-1基因在RM-1细胞中高表达，而在小鼠正常组织中表达非常低。pUb-MTDH/AEG-1DNA疫苗同对照组Pub、PBS组比较能显著激发CD4~+和CD8~+T细胞及细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应；有效抑制RM-1原位前列腺癌生长（p＜0.001）及盆腔、腹膜后淋巴结转移（p＜0.05）；能明显增强原位肿瘤中CD8~+分子的表达（p＜0.01），促进肿瘤细胞凋亡（p＜0.001）。pUb-MTDH/AEG-1DNA疫苗与化疗药物紫杉醇联合运用同单独运用MTDH/AEG-1、紫杉醇、pUb治疗组相比，能显著抑制RM-1皮下移植瘤生长（＊P<0.05）及有效延长荷瘤小鼠生存时间（＃P＜0.05），促使肿瘤组织中Bcl-2表达下调、Bax表达上调而促进肿瘤细胞凋亡。结论：以MTDH/AEG-1为靶点的基因疫苗能有效抑制小鼠前列腺癌的生长转移及增强化疗药物紫杉醇的敏感性。MTDH/AEG-1DNA疫苗与化疗药物紫杉醇联合运用在前列腺癌的治疗中显示出了良好的优越性，我们期待该基因疫苗还能更好地与外科手术、放射治疗等联合运用，在高表达MTDH/AEG-1基因的（前列腺癌、乳腺癌、肝癌、神经母细胞瘤、黑色素瘤、食管癌、胃癌等）恶性肿瘤的治疗中能发挥更大优势。