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目的:mi R-126-3P(mi R-126)有许多靶基因,其中VEGF、PI3K、Spred1、IRS1等都与糖代谢有关。mi R-126在2型糖尿病的患者血浆中含量逐渐减少。我们的前期研究发现,IRS-1和PIK3R2是mi R-126的靶点,因此mi R-126可以通过IRS-1/PI3K/Akt通路,参与β细胞的代谢调节。但是生物信息学数据分析显示IRS2也是mi R-126的靶基因,而IRS1和IRS2的功能又是密不可分的,因此,有必要对mi R-126调节IRS2的预测进行验证,并对其在β细胞的代谢调节中的生理学意义进行研究。方法:一、mi R-126调节IRS2的研究(1)生物信息学法预测mi R-126-3P的靶基因和IRS2上的“种子”序列利用mi Rbase、Target Scan、Bibiserve、Pictar等micro RNA靶基因预测网站和软件,对mi R-126-3P的二级结构和靶基因进行预测分析,并且找出IRS2上mi R-126作用的“种子”序列。(2)双荧光素酶报告基因法检测mi R-126能否调控IRS2基因表达。(3)Western blot和Real-Time PCR法分别检测mi RNA-126-3p能否调控IRS2基因表达。二、通过Real-Time PCR法检测高糖刺激体外培养的INS1细胞,检测高糖刺激对内源性mi R-126-3p以及IRS1、IRS2表达的影响。三、高糖刺激INS1细胞,CCK8法检测细胞增殖率,研究micro RNA-126对β细胞增殖的影响。结果:(1)双荧光素酶报告基因实验证实,mi R-126-3p通过IRS-2的3′UTR中的6个碱基的种子序列可以抑制荧光素酶报告基因的表达,种子序列中的两个碱基的突变可以逆转这一抑制作用,证明mi R-126可以直接抑制IRS2的表达。(2)Western blot和Real-Time PCR法分别证明,mi R-126-3P可明显抑制IRS2的m RNA和蛋白水平的表达,并可明显改变IRS1/IRS2的比例。(3)高糖刺激可以引起内源性mi R-126-3p的迅速升高,4h即达到峰值,IRS2和IRS1也都略有变化,但IRS2较IRS1变化更为强烈。胰岛素可以加速内源性mi R-126-3p的迅速升高现象。(4)mi R-126-3p可明显抑制INS-1细胞的增殖,高糖刺激可以加剧mi R-126抑制细胞增殖的作用。结论:mi R-126-3p对IRS2有抑制作用,并可以明显改变IRS1/IRS2的比例,抑制细胞的增殖。