以中药为代表的天然产物化学成分复杂,对于中药化学成分的系统性认知一直是中药研究的重点领域。本研究以淫羊藿提取物为研究对象,试图构建了一种基于在线二维色谱系统性分离制备淫羊藿黄酮化学成分的方法,为中药化学成分研究提供参考。以淫羊藿提取物为研究对象,以C18柱、Xion柱分别对提取物进行全梯度HPLC分析确并定分离对象。将淫羊藿提取物在3个不同色谱条件下进行分析,采集色谱分离信息,导入XTool色谱专家软件进行一维分离条件方法优化,最终确定最佳一维分离条件;基于实验室自主研发的分离—富集模式的反相二维色谱—制备色谱工厂（Preparative Chromatography Platform,PCP）进行一维制备,确定分离重现性、最佳上样量和切割程序,并应用该方法进行一维分离制备;对一维分离获得的多个组分采用通过XTool色谱专家软件优化的二维制备分离条件进一步分离,获得高纯度组分及单体;对获得的单体组分通过UV、HPLC、核磁共振手段进行结构表征。通过对色谱分离填料及溶剂体系探讨,在以C18填料、乙腈-水为流动相进行全梯度HPLC分析最多有44个可见峰,经紫外检测均为黄酮类化合物。将色谱峰信息导入XTool色谱专家软件进行一维分离条件方法模拟与优化;将优化好的条件线性放大到制备色谱工厂,应用PCP进行一维分离制备,同时确定最佳上样量为1000 mg,设定好切割程序进行一维分离,得到18个组分;将获得的18个组分使用XTool色谱专家软件优化后的二维分离条件进行制备,得到21个高纯度组分,其中将含量较高的6个单体化合物,采用UV、HPLC、核磁共振手段进行结构表征,鉴定6个淫羊藿黄酮化合物分别为朝藿定A（34 mg）、朝藿定B（12.4 mg）、朝藿定C（52.9 mg）、淫羊藿苷（53.3 mg）、箭藿苷A（14.5 mg）、宝藿苷-Ⅰ（45 mg）。纯度分别为98.15%、98.60%、98.15%、98.55%、98.17%、98.99%。研究结果表明,应用上述方法,基本实现了淫羊藿黄酮高效快速、系统分离,也为后续复杂中药的提取分离提供了新思路与新方法。